基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
2期
129-132
,共4页
易敏%周向东%李升锦%陈维贤
易敏%週嚮東%李升錦%陳維賢
역민%주향동%리승금%진유현
结核分枝杆菌%EIS基因%自噬
結覈分枝桿菌%EIS基因%自噬
결핵분지간균%EIS기인%자서
目的 构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响.方法 采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性；将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC3Ⅱ/I的表达水平.结果 成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1-EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少(P＜0.05),重组质粒表达42 ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平.结论 结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关.
目的 構建結覈分枝桿菌EIS基因錶達質粒,探討其對人肺腺癌A549細胞自噬的影響.方法 採用PCR技術擴增EIS基因片段併插入空載質粒pcDNA3.1-3flag中,雙酶切、測序鑒定剋隆質粒的正確性；將重組質粒與對照空載質粒分彆與自噬體熒光錶達質粒GFP-LC3共轉染細胞併以自噬誘導劑雷帕黴素處理,熒光顯微鏡下觀察自噬熒光併計數,Western blot檢測EIS蛋白及自噬蛋白LC3Ⅱ/I的錶達水平.結果 成功構建EIS基因重組錶達質粒PcDNA3.1-EIS-3flag,該質粒共轉染細胞組自噬熒光小點較對照組明顯減少(P＜0.05),重組質粒錶達42 ku看到蛋白併可抑製自噬蛋白錶達水平.結論 結覈分枝桿菌EIS基因可抑製A549細胞自噬的形成,其抑製作用與結覈分枝桿菌持留性相關.
목적 구건결핵분지간균EIS기인표체질립,탐토기대인폐선암A549세포자서적영향.방법 채용PCR기술확증EIS기인편단병삽입공재질립pcDNA3.1-3flag중,쌍매절、측서감정극륭질립적정학성；장중조질립여대조공재질립분별여자서체형광표체질립GFP-LC3공전염세포병이자서유도제뢰파매소처리,형광현미경하관찰자서형광병계수,Western blot검측EIS단백급자서단백LC3Ⅱ/I적표체수평.결과 성공구건EIS기인중조표체질립PcDNA3.1-EIS-3flag,해질립공전염세포조자서형광소점교대조조명현감소(P＜0.05),중조질립표체42 ku간도단백병가억제자서단백표체수평.결론 결핵분지간균EIS기인가억제A549세포자서적형성,기억제작용여결핵분지간균지류성상관.
