基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
4期
406-411
,共6页
权会琴%聂丹%周帆%陈林林%陈庆美%单晓亮%谢青%唐霓
權會琴%聶丹%週帆%陳林林%陳慶美%單曉亮%謝青%唐霓
권회금%섭단%주범%진림림%진경미%단효량%사청%당예
SFRP1%启动子%荧光素酶报告基因载体%HCV核心蛋白
SFRP1%啟動子%熒光素酶報告基因載體%HCV覈心蛋白
SFRP1%계동자%형광소매보고기인재체%HCV핵심단백
目的 探讨HCV核心蛋白对Wnt信号通路抑制分子SFRP1启动子活性的影响.方法 以人肝癌细胞系Huh7基因组为模板,扩增SFRP1启动子区不同片段(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),以pGL3-Basic为载体分别构建SFRP1启动子区截短报告质粒.将构建好的质粒与pRL-TK共转染HEK293细胞,确定启动子区活性最强区域；分别用编码HCV核心蛋白的腺病毒或GFP对照腺病毒感染已转染重组报告质粒的SK-Hep1细胞,观察AdCore对SFRP1启动子活性的调控作用.结果 SFRP1启动子区域-407～-27 bp片段活性最强；与pGL3-Basic对照组相比较,相对荧光素酶活性增加了37.31 ±4.45倍(P＜0.01),pGL3-S2～S5的活性分别增加了28.74±2.47、13.56 ±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P＜0.01)；HCV Core蛋白能够抑制SFRP1基因启动子区活性,其对pGL3-S1的抑制作用最强,与GFP对照组相比较,抑制率为63.8％ ±1.0％ (P＜0.01).结论 HCV核心蛋白通过抑制SFRP1启动子区活性下调SFRP1基因的表达,可能参与Wnt/β-catenin信号通路的活化,并与原发性肝癌的发生密切相关.
目的 探討HCV覈心蛋白對Wnt信號通路抑製分子SFRP1啟動子活性的影響.方法 以人肝癌細胞繫Huh7基因組為模闆,擴增SFRP1啟動子區不同片段(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),以pGL3-Basic為載體分彆構建SFRP1啟動子區截短報告質粒.將構建好的質粒與pRL-TK共轉染HEK293細胞,確定啟動子區活性最彊區域；分彆用編碼HCV覈心蛋白的腺病毒或GFP對照腺病毒感染已轉染重組報告質粒的SK-Hep1細胞,觀察AdCore對SFRP1啟動子活性的調控作用.結果 SFRP1啟動子區域-407～-27 bp片段活性最彊；與pGL3-Basic對照組相比較,相對熒光素酶活性增加瞭37.31 ±4.45倍(P＜0.01),pGL3-S2～S5的活性分彆增加瞭28.74±2.47、13.56 ±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P＜0.01)；HCV Core蛋白能夠抑製SFRP1基因啟動子區活性,其對pGL3-S1的抑製作用最彊,與GFP對照組相比較,抑製率為63.8％ ±1.0％ (P＜0.01).結論 HCV覈心蛋白通過抑製SFRP1啟動子區活性下調SFRP1基因的錶達,可能參與Wnt/β-catenin信號通路的活化,併與原髮性肝癌的髮生密切相關.
목적 탐토HCV핵심단백대Wnt신호통로억제분자SFRP1계동자활성적영향.방법 이인간암세포계Huh7기인조위모판,확증SFRP1계동자구불동편단(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),이pGL3-Basic위재체분별구건SFRP1계동자구절단보고질립.장구건호적질립여pRL-TK공전염HEK293세포,학정계동자구활성최강구역；분별용편마HCV핵심단백적선병독혹GFP대조선병독감염이전염중조보고질립적SK-Hep1세포,관찰AdCore대SFRP1계동자활성적조공작용.결과 SFRP1계동자구역-407～-27 bp편단활성최강；여pGL3-Basic대조조상비교,상대형광소매활성증가료37.31 ±4.45배(P＜0.01),pGL3-S2～S5적활성분별증가료28.74±2.47、13.56 ±2.52、12.97±0.87화8.29±0.09배(P＜0.01)；HCV Core단백능구억제SFRP1기인계동자구활성,기대pGL3-S1적억제작용최강,여GFP대조조상비교,억제솔위63.8％ ±1.0％ (P＜0.01).결론 HCV핵심단백통과억제SFRP1계동자구활성하조SFRP1기인적표체,가능삼여Wnt/β-catenin신호통로적활화,병여원발성간암적발생밀절상관.
