基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
6期
763-768
,共6页
晏浩%李文林%徐建军%朱书强%龙翔%车建鹏
晏浩%李文林%徐建軍%硃書彊%龍翔%車建鵬
안호%리문림%서건군%주서강%룡상%차건붕
缺血再灌注%自噬%DJ-1%凋亡%氧自由基
缺血再灌註%自噬%DJ-1%凋亡%氧自由基
결혈재관주%자서%DJ-1%조망%양자유기
ischemia-reperfusion%autophagy%apoptosis%DJ-1%ROS
目的 探讨D J-1拮抗氧化应激诱导过度自噬在缺血再灌注心肌损伤中的保护机制.方法 以慢病毒为shRNA DJ-1载体感染心肌HL-1细胞系构建缺氧复氧损伤模型.Western blot检测shRNA DJ-1沉默效率和LC3、Beclin-1和DJ-1蛋白表达,流式细胞术Annexin Ⅴ和PI染色分别检测凋亡和坏死,MDC和DCFH-DA染色分别检测细胞内自噬体和氧自由基(ROS)水平,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬体数量变化.结果 1)慢病毒为shRNAD J-1载体感染心肌HL-1细胞后DJ-1表达水平下调；2)缺氧复氧显著上调ROS,而shDJ-1加剧缺氧复氧ROS水平上调,NAC可以有效下调细胞内ROS水平；3)Western blot检测LC3、Beclin-1自噬标志蛋白和MDC染色细胞内自噬体结果均认为缺氧复氧促进自噬,而shDJ-1加剧缺氧复氧导致的自噬上调,NAC抑制自噬上调；4)流式细胞术检测显示shDJ-1增加缺氧复氧凋亡,NAC可以减少心肌细胞凋亡.结论 DJ-1拮抗ROS介导Beclin-1上调参与保护缺血再灌注心肌.
目的 探討D J-1拮抗氧化應激誘導過度自噬在缺血再灌註心肌損傷中的保護機製.方法 以慢病毒為shRNA DJ-1載體感染心肌HL-1細胞繫構建缺氧複氧損傷模型.Western blot檢測shRNA DJ-1沉默效率和LC3、Beclin-1和DJ-1蛋白錶達,流式細胞術Annexin Ⅴ和PI染色分彆檢測凋亡和壞死,MDC和DCFH-DA染色分彆檢測細胞內自噬體和氧自由基(ROS)水平,激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內自噬體數量變化.結果 1)慢病毒為shRNAD J-1載體感染心肌HL-1細胞後DJ-1錶達水平下調；2)缺氧複氧顯著上調ROS,而shDJ-1加劇缺氧複氧ROS水平上調,NAC可以有效下調細胞內ROS水平；3)Western blot檢測LC3、Beclin-1自噬標誌蛋白和MDC染色細胞內自噬體結果均認為缺氧複氧促進自噬,而shDJ-1加劇缺氧複氧導緻的自噬上調,NAC抑製自噬上調；4)流式細胞術檢測顯示shDJ-1增加缺氧複氧凋亡,NAC可以減少心肌細胞凋亡.結論 DJ-1拮抗ROS介導Beclin-1上調參與保護缺血再灌註心肌.
목적 탐토D J-1길항양화응격유도과도자서재결혈재관주심기손상중적보호궤제.방법 이만병독위shRNA DJ-1재체감염심기HL-1세포계구건결양복양손상모형.Western blot검측shRNA DJ-1침묵효솔화LC3、Beclin-1화DJ-1단백표체,류식세포술Annexin Ⅴ화PI염색분별검측조망화배사,MDC화DCFH-DA염색분별검측세포내자서체화양자유기(ROS)수평,격광공취초현미경관찰세포내자서체수량변화.결과 1)만병독위shRNAD J-1재체감염심기HL-1세포후DJ-1표체수평하조；2)결양복양현저상조ROS,이shDJ-1가극결양복양ROS수평상조,NAC가이유효하조세포내ROS수평；3)Western blot검측LC3、Beclin-1자서표지단백화MDC염색세포내자서체결과균인위결양복양촉진자서,이shDJ-1가극결양복양도치적자서상조,NAC억제자서상조；4)류식세포술검측현시shDJ-1증가결양복양조망,NAC가이감소심기세포조망.결론 DJ-1길항ROS개도Beclin-1상조삼여보호결혈재관주심기.
