基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
6期
655-660
,共6页
载脂蛋白%kringle结构域%毕赤酵母%新生血管
載脂蛋白%kringle結構域%畢赤酵母%新生血管
재지단백%kringle결구역%필적효모%신생혈관
apolipoprotein%kringle%Pichia pastoris%angiogenesis
目的 利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力.方法 分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringle Ⅴ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gle Ⅴ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒；转染毕赤酵母X-33分泌表达RHAKA与RHAKB,RHAKs利用His· Tag亲和层析纯化,以及反相高效液相色谱与氨基酸残基测序鉴定；明确RHAKs的糖基化及二硫键形成情况后,利用细胞增殖实验与鸡胚绒毛尿囊膜(C AM)实验检测RHAKs对新生血管和肿瘤细胞增殖的影响.结果 毕赤酵母可以大量表达RHAKs,并对RHAKs进行翻译后修饰；RHAKA与RHAKB可以抑制血管内皮细胞的增殖和CAM的新生血管,但对肿瘤细胞增殖无直接的抑制作用.结论 利用毕赤酵母高效重组表达人Apo(a)羧基末端kringle结构域可以显著抑制新生血管.
目的 利用畢赤酵母重組錶達人載脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末耑kringle結構域,明確其抑製新生血管和腫瘤細胞增殖的能力.方法 分彆構建重組錶達Apo(a)羧基末耑kringle Ⅴ結構域(RHAKA)與kringleⅣ10型-krin-gle Ⅴ結構域(RHAKB)的pPICZαA質粒；轉染畢赤酵母X-33分泌錶達RHAKA與RHAKB,RHAKs利用His· Tag親和層析純化,以及反相高效液相色譜與氨基痠殘基測序鑒定；明確RHAKs的糖基化及二硫鍵形成情況後,利用細胞增殖實驗與鷄胚絨毛尿囊膜(C AM)實驗檢測RHAKs對新生血管和腫瘤細胞增殖的影響.結果 畢赤酵母可以大量錶達RHAKs,併對RHAKs進行翻譯後脩飾；RHAKA與RHAKB可以抑製血管內皮細胞的增殖和CAM的新生血管,但對腫瘤細胞增殖無直接的抑製作用.結論 利用畢赤酵母高效重組錶達人Apo(a)羧基末耑kringle結構域可以顯著抑製新生血管.
목적 이용필적효모중조표체인재지단백(a)[Apo(a)]최기말단kringle결구역,명학기억제신생혈관화종류세포증식적능력.방법 분별구건중조표체Apo(a)최기말단kringle Ⅴ결구역(RHAKA)여kringleⅣ10형-krin-gle Ⅴ결구역(RHAKB)적pPICZαA질립；전염필적효모X-33분비표체RHAKA여RHAKB,RHAKs이용His· Tag친화층석순화,이급반상고효액상색보여안기산잔기측서감정；명학RHAKs적당기화급이류건형성정황후,이용세포증식실험여계배융모뇨낭막(C AM)실험검측RHAKs대신생혈관화종류세포증식적영향.결과 필적효모가이대량표체RHAKs,병대RHAKs진행번역후수식；RHAKA여RHAKB가이억제혈관내피세포적증식화CAM적신생혈관,단대종류세포증식무직접적억제작용.결론 이용필적효모고효중조표체인Apo(a)최기말단kringle결구역가이현저억제신생혈관.
