北京医学
北京醫學
북경의학
BEIJING MEDICAL JOURNAL
2013年
6期
427-430
,共4页
刘道洁%徐树莹%丁渭%宋凤丽%汪志鹏%张超%乔录新
劉道潔%徐樹瑩%丁渭%宋鳳麗%汪誌鵬%張超%喬錄新
류도길%서수형%정위%송봉려%왕지붕%장초%교록신
P53蛋白异构体(△40P53)%DNA损伤%细胞凋亡%细胞周期停滞
P53蛋白異構體(△40P53)%DNA損傷%細胞凋亡%細胞週期停滯
P53단백이구체(△40P53)%DNA손상%세포조망%세포주기정체
△40P53%DNA damage%Apoptosis%Cell cycle arrest
目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同；免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达；LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05)；流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.
目的 探討HCT116 p53-/-細胞△40P53在脫氧覈糖覈痠(DNA)損傷時細胞凋亡和細胞週期停滯中的作用,明確△40P53與野生型P53的不同作用.方法 熒光素酶報告基因和免疫印跡法檢測△40P53在DNA損傷後轉錄活性和錶達情況,流式細胞技術檢測DNA損傷後細胞週期停滯情況,乳痠脫氫酶(LDH)檢測分析DNA損傷後細胞凋亡情況,分析△40P53的生物學功能.結果HCT116 p53+/+細胞中bax和p21基因的啟動子活性在甲烷磺痠甲酯(MMS)刺激時比無MMS刺激時高3～5倍,HCT116 p53-/-細胞中bax和p21基因的啟動子活性在有無MMS刺激時無顯著不同；免疫印跡錶明有和無MMS刺激的細胞△40P53保持在較高水平,野生型P53經MMS刺激過度錶達；LDH法檢測50 μg/ml的MMS刺激後52.2％的HCT116 p53+/+細胞凋亡,而隻有32.5％的HCT116 p53-/-細胞凋亡,差異有統計學意義(t=84.2,P＜0.05)；流式細胞儀檢測MMS處理後88％的HCT116 p53-/-細胞進入G2/S期細胞,66％的HCT116 p53+/+細胞進入G2/S期細胞.結論 經MMS刺激的HCT116 p53-/-細胞的△40P53不能誘導細胞凋亡和細胞週期阻滯.
목적 탐토HCT116 p53-/-세포△40P53재탈양핵당핵산(DNA)손상시세포조망화세포주기정체중적작용,명학△40P53여야생형P53적불동작용.방법 형광소매보고기인화면역인적법검측△40P53재DNA손상후전록활성화표체정황,류식세포기술검측DNA손상후세포주기정체정황,유산탈경매(LDH)검측분석DNA손상후세포조망정황,분석△40P53적생물학공능.결과HCT116 p53+/+세포중bax화p21기인적계동자활성재갑완광산갑지(MMS)자격시비무MMS자격시고3～5배,HCT116 p53-/-세포중bax화p21기인적계동자활성재유무MMS자격시무현저불동；면역인적표명유화무MMS자격적세포△40P53보지재교고수평,야생형P53경MMS자격과도표체；LDH법검측50 μg/ml적MMS자격후52.2％적HCT116 p53+/+세포조망,이지유32.5％적HCT116 p53-/-세포조망,차이유통계학의의(t=84.2,P＜0.05)；류식세포의검측MMS처리후88％적HCT116 p53-/-세포진입G2/S기세포,66％적HCT116 p53+/+세포진입G2/S기세포.결론 경MMS자격적HCT116 p53-/-세포적△40P53불능유도세포조망화세포주기조체.
