基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
8期
986-991
,共6页
张文军%黄志文%李喜芳%张成成%刘映乐
張文軍%黃誌文%李喜芳%張成成%劉映樂
장문군%황지문%리희방%장성성%류영악
M1GS核酶%丙型肝炎病毒%5'非翻译区%抗病毒
M1GS覈酶%丙型肝炎病毒%5'非翻譯區%抗病毒
M1GS핵매%병형간염병독%5'비번역구%항병독
M1GS ribozyme%HCV%5'UTR%antiviral
目的 基于大肠埃希菌核糖核酸酶P的催化性RNA亚基(M1 RNA),人工构建一种抗丙肝病毒(HCV)的新型靶向性核酶,并进一步鉴定其胞外靶向切割活性及胞内抗病毒作用.方法 首先采用计算机软件对HCV基因组保守区——5'非翻译区(5'UTR)的序列与结构进行分析,以确定候选靶位.针对靶位的侧翼序列,设计与之互补的引导序列(GS),然后通过PCR将其共价连接至M1RNA的3 '末端,从而构建靶向性的M1GS核酶.结果 针对HCV 5'UTR第67位的胞嘧啶成功构建了一种M1GS核酶——M1GS-HCV/C67.该人工核酶不仅在体外可对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的宿主细胞内也能够显著抑制HCV核心蛋白的表达(P＜0.05),并使上清液HCV RNA的拷贝数减少约800倍(P＜0.01).结论 M1GS-HCV/C67这种新型靶向性核酶具有良好的体外抗HCV活性,其成功构建为HCV感染的治疗研究提供了另一种潜在途径.
目的 基于大腸埃希菌覈糖覈痠酶P的催化性RNA亞基(M1 RNA),人工構建一種抗丙肝病毒(HCV)的新型靶嚮性覈酶,併進一步鑒定其胞外靶嚮切割活性及胞內抗病毒作用.方法 首先採用計算機軟件對HCV基因組保守區——5'非翻譯區(5'UTR)的序列與結構進行分析,以確定候選靶位.針對靶位的側翼序列,設計與之互補的引導序列(GS),然後通過PCR將其共價連接至M1RNA的3 '末耑,從而構建靶嚮性的M1GS覈酶.結果 針對HCV 5'UTR第67位的胞嘧啶成功構建瞭一種M1GS覈酶——M1GS-HCV/C67.該人工覈酶不僅在體外可對靶RNA片段產生特異性切割,在HCV感染的宿主細胞內也能夠顯著抑製HCV覈心蛋白的錶達(P＜0.05),併使上清液HCV RNA的拷貝數減少約800倍(P＜0.01).結論 M1GS-HCV/C67這種新型靶嚮性覈酶具有良好的體外抗HCV活性,其成功構建為HCV感染的治療研究提供瞭另一種潛在途徑.
목적 기우대장애희균핵당핵산매P적최화성RNA아기(M1 RNA),인공구건일충항병간병독(HCV)적신형파향성핵매,병진일보감정기포외파향절할활성급포내항병독작용.방법 수선채용계산궤연건대HCV기인조보수구——5'비번역구(5'UTR)적서렬여결구진행분석,이학정후선파위.침대파위적측익서렬,설계여지호보적인도서렬(GS),연후통과PCR장기공개련접지M1RNA적3 '말단,종이구건파향성적M1GS핵매.결과 침대HCV 5'UTR제67위적포밀정성공구건료일충M1GS핵매——M1GS-HCV/C67.해인공핵매불부재체외가대파RNA편단산생특이성절할,재HCV감염적숙주세포내야능구현저억제HCV핵심단백적표체(P＜0.05),병사상청액HCV RNA적고패수감소약800배(P＜0.01).결론 M1GS-HCV/C67저충신형파향성핵매구유량호적체외항HCV활성,기성공구건위HCV감염적치료연구제공료령일충잠재도경.
