基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
9期
1199-1204
,共6页
陈丽妹%叶韵斌%刘枋%陈慧菁%李洁羽%苏光建%林巧燕
陳麗妹%葉韻斌%劉枋%陳慧菁%李潔羽%囌光建%林巧燕
진려매%협운빈%류방%진혜정%리길우%소광건%림교연
结直肠癌%Grb2%RNA干扰%慢病毒%信号通路
結直腸癌%Grb2%RNA榦擾%慢病毒%信號通路
결직장암%Grb2%RNA간우%만병독%신호통로
colorectal cancer%Grb2%RNAi%lentivirus%signaling pathway
目的 研究Grb2 shRNA转染对肠癌细胞HT29增殖相关信号通路的影响,探讨以Grb2为肠癌治疗靶点的可行性.方法 应用shRNA慢病毒质粒系统,将Grb2 shRNA转染至293T细胞,获得5株不同序列Grb2 shRNA慢病毒颗粒,并感染肠癌HT29细胞,分别获得的5株感染Grb2 shRNA慢病毒颗粒的肠癌HT29细胞系为实验组(即感染Grb2 shRNA的细胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73),以eGFP shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞为阴性对照组.MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCR检测Grb2 mRNA表达,Western blot检测Grb2、P42/44 ERK、磷酸化P42/44 ERK、Akt、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT5等信号通路分子表达的改变.结果 感染shGrb2病毒72 h,HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73两株细胞在mRNA和蛋白水平均出现抑制现象.HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞在感染后24h A值分别为0.176±0.045,0.186±0.013,感染48 h后为0.347±0.048、0.382±0.041均显著高于空白对照、阴性对照(P ＜0.001),72 h为0.934±0.038、0.983±0.205高于空白对照、阴性对照(P＜0.01);感染后72 h,phospho-P42/44 ERK、Akt、phospho-Akt明显下降,而ERK、STAT5表达不受影响.结论 在HT29细胞,Grb2 mRNA和蛋白水平上明显抑制,可诱导HT29细胞增殖和相关信号传导通路分子表达下调.
目的 研究Grb2 shRNA轉染對腸癌細胞HT29增殖相關信號通路的影響,探討以Grb2為腸癌治療靶點的可行性.方法 應用shRNA慢病毒質粒繫統,將Grb2 shRNA轉染至293T細胞,穫得5株不同序列Grb2 shRNA慢病毒顆粒,併感染腸癌HT29細胞,分彆穫得的5株感染Grb2 shRNA慢病毒顆粒的腸癌HT29細胞繫為實驗組(即感染Grb2 shRNA的細胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73),以eGFP shRNA慢病毒感染腸癌HT29細胞為陰性對照組.MTT法檢測細胞增殖情況,RT-PCR檢測Grb2 mRNA錶達,Western blot檢測Grb2、P42/44 ERK、燐痠化P42/44 ERK、Akt、燐痠化Akt(P-Akt)和STAT5等信號通路分子錶達的改變.結果 感染shGrb2病毒72 h,HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73兩株細胞在mRNA和蛋白水平均齣現抑製現象.HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73細胞在感染後24h A值分彆為0.176±0.045,0.186±0.013,感染48 h後為0.347±0.048、0.382±0.041均顯著高于空白對照、陰性對照(P ＜0.001),72 h為0.934±0.038、0.983±0.205高于空白對照、陰性對照(P＜0.01);感染後72 h,phospho-P42/44 ERK、Akt、phospho-Akt明顯下降,而ERK、STAT5錶達不受影響.結論 在HT29細胞,Grb2 mRNA和蛋白水平上明顯抑製,可誘導HT29細胞增殖和相關信號傳導通路分子錶達下調.
목적 연구Grb2 shRNA전염대장암세포HT29증식상관신호통로적영향,탐토이Grb2위장암치료파점적가행성.방법 응용shRNA만병독질립계통,장Grb2 shRNA전염지293T세포,획득5주불동서렬Grb2 shRNA만병독과립,병감염장암HT29세포,분별획득적5주감염Grb2 shRNA만병독과립적장암HT29세포계위실험조(즉감염Grb2 shRNA적세포HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73),이eGFP shRNA만병독감염장암HT29세포위음성대조조.MTT법검측세포증식정황,RT-PCR검측Grb2 mRNA표체,Western blot검측Grb2、P42/44 ERK、린산화P42/44 ERK、Akt、린산화Akt(P-Akt)화STAT5등신호통로분자표체적개변.결과 감염shGrb2병독72 h,HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73량주세포재mRNA화단백수평균출현억제현상.HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73세포재감염후24h A치분별위0.176±0.045,0.186±0.013,감염48 h후위0.347±0.048、0.382±0.041균현저고우공백대조、음성대조(P ＜0.001),72 h위0.934±0.038、0.983±0.205고우공백대조、음성대조(P＜0.01);감염후72 h,phospho-P42/44 ERK、Akt、phospho-Akt명현하강,이ERK、STAT5표체불수영향.결론 재HT29세포,Grb2 mRNA화단백수평상명현억제,가유도HT29세포증식화상관신호전도통로분자표체하조.
