基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
9期
1165-1170
,共6页
薛婧%高锡强%傅春燕%魏强
薛婧%高錫彊%傅春燕%魏彊
설청%고석강%부춘연%위강
半乳糖凝集素-3%结合%N-糖基化位点%CD45RO%Jurkat T细胞
半乳糖凝集素-3%結閤%N-糖基化位點%CD45RO%Jurkat T細胞
반유당응집소-3%결합%N-당기화위점%CD45RO%Jurkat T세포
galectin-3%binding%N-glycosylation site%CD45RO%Jurkat T cell
目的 构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况.方法 采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株.通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况.结果 成功构建了1 1个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45 RO突变体能稳定表达于细胞表面.galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱.结论 CD45RON-糖基化位点对galectin-3与CD45 RO-J45.01细胞的结合有调节作用.
目的 構建CD45RO不同N-糖基化位點突變的T細胞株,併檢測其與galectin-3的結閤情況.方法 採用N→Q定點突變技術分彆去除CD45RO的11箇N-糖基化位點,製備單箇N-糖基化位點缺失的CD45RO,然後將其導入慢病毒錶達載體pWPXL中,11箇攜帶單箇N-糖基化位點缺失的CD45RO重組慢病毒質粒與慢病毒包裝質粒psPAX2和MD2.G共轉染293T細胞,將包裝重組慢病毒感染CD45-的J45.01細胞,流式分選後穫得11株分彆錶達CD45RO單箇N-糖基化位點缺失的J45.01 T細胞株.通過RT-PCR和流式細胞術分彆從RNA水平和蛋白水平驗證CD45RO突變體的轉錄和錶達,應用流式細胞術檢測CD45RO突變細胞株與galectin-3的結閤情況.結果 成功構建瞭1 1箇CD45RO單箇N-糖基化位點缺失的T細胞株,各突變細胞株能穩定錶達突變基因,經測序再次證實突變位點正確,CD45 RO突變體能穩定錶達于細胞錶麵.galectin-3與N327Q突變細胞的結閤明顯增彊,與N36Q突變細胞和N217Q突變細胞的結閤明顯減弱.結論 CD45RON-糖基化位點對galectin-3與CD45 RO-J45.01細胞的結閤有調節作用.
목적 구건CD45RO불동N-당기화위점돌변적T세포주,병검측기여galectin-3적결합정황.방법 채용N→Q정점돌변기술분별거제CD45RO적11개N-당기화위점,제비단개N-당기화위점결실적CD45RO,연후장기도입만병독표체재체pWPXL중,11개휴대단개N-당기화위점결실적CD45RO중조만병독질립여만병독포장질립psPAX2화MD2.G공전염293T세포,장포장중조만병독감염CD45-적J45.01세포,류식분선후획득11주분별표체CD45RO단개N-당기화위점결실적J45.01 T세포주.통과RT-PCR화류식세포술분별종RNA수평화단백수평험증CD45RO돌변체적전록화표체,응용류식세포술검측CD45RO돌변세포주여galectin-3적결합정황.결과 성공구건료1 1개CD45RO단개N-당기화위점결실적T세포주,각돌변세포주능은정표체돌변기인,경측서재차증실돌변위점정학,CD45 RO돌변체능은정표체우세포표면.galectin-3여N327Q돌변세포적결합명현증강,여N36Q돌변세포화N217Q돌변세포적결합명현감약.결론 CD45RON-당기화위점대galectin-3여CD45 RO-J45.01세포적결합유조절작용.
