基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
10期
1235-1241
,共7页
葛正行%李波%周洵%李常
葛正行%李波%週洵%李常
갈정행%리파%주순%리상
慢性阻塞性肺疾病%气道重塑%气道成纤维细胞%大鼠增殖抑制基因
慢性阻塞性肺疾病%氣道重塑%氣道成纖維細胞%大鼠增殖抑製基因
만성조새성폐질병%기도중소%기도성섬유세포%대서증식억제기인
Chronic obstructive pulmonary disease(COPD)%Airway remodeling%Airway Fibroblast%rHSG gene
目的 采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果 证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功.转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P＜0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P＜0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达最大(P＜0.05).结论 外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡.
目的 採用脂質體介導攜帶大鼠增殖抑製基因(rHSG)的真覈錶達載體,轉染至COPD模型大鼠氣道成纖維細胞,為榦預COPD的氣道成纖維細胞增殖,打下基因治療基礎.方法 構建真覈錶達載體pEGFP-N1,對重組質粒pEGFP-rHSG進行鑒定併測序;採用暘離子脂質體將重組質粒pEGFP-rHSG轉染至COPD模型大鼠氣道成纖維細胞,分彆感染24和48 h及3、5和7d後,用實時熒光定量PCR(real-time PCR)檢測rHSG mRNA的不同時段錶達水平,MTT、流式細胞儀檢測轉染後成纖維細胞增殖及凋亡.結果 證實重組質粒pEGFP-rHSG構建成功.轉染24 h,rHSG mRNA錶達量開始增加,7d達到高峰,各轉染組間rHSG mRNA錶達差異顯著(P＜0.05);轉染48 h後rHSG基因轉染組成纖維細胞的增殖抑製明顯低于未轉染組成纖維細胞(P＜0.05);轉染後48 h凋亡開始,與模型對照組相比,隨著時間延長,凋亡逐漸增加,7d時凋亡率達最大(P＜0.05).結論 外源性rHSG基因介導,能夠使氣道成纖維細胞的增殖受到抑製併誘導其凋亡.
목적 채용지질체개도휴대대서증식억제기인(rHSG)적진핵표체재체,전염지COPD모형대서기도성섬유세포,위간예COPD적기도성섬유세포증식,타하기인치료기출.방법 구건진핵표체재체pEGFP-N1,대중조질립pEGFP-rHSG진행감정병측서;채용양리자지질체장중조질립pEGFP-rHSG전염지COPD모형대서기도성섬유세포,분별감염24화48 h급3、5화7d후,용실시형광정량PCR(real-time PCR)검측rHSG mRNA적불동시단표체수평,MTT、류식세포의검측전염후성섬유세포증식급조망.결과 증실중조질립pEGFP-rHSG구건성공.전염24 h,rHSG mRNA표체량개시증가,7d체도고봉,각전염조간rHSG mRNA표체차이현저(P＜0.05);전염48 h후rHSG기인전염조성섬유세포적증식억제명현저우미전염조성섬유세포(P＜0.05);전염후48 h조망개시,여모형대조조상비,수착시간연장,조망축점증가,7d시조망솔체최대(P＜0.05).결론 외원성rHSG기인개도,능구사기도성섬유세포적증식수도억제병유도기조망.
