重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化
중조단백HSP65-6×(IA2-P2)-His적구건、표체급분리순화
Construction,expression and purification of recombinant protein HSP65-6×(IA2-P2)-His
  • 万方数据
    安徽医药 안휘의약
    ANHUI MEDICAL AND PHARMACEUTICAL JOURNAL
    2013年 5期 732-734 ,共3页

    李泰明%韩萌萌%林旋%刘俊%吴洁%金亮%刘景晶%徐茂磊

    리태명%한맹맹%림선%류준%오길%금량%류경정%서무뢰

    重组蛋白%发酵%纯化%鉴定 重組蛋白%髮酵%純化%鑒定
    중조단백%발효%순화%감정
    目的 构建HSP65-6×(IA2-P2)-His表达载体并研究其在大肠杆菌中的表达及分离纯化.方法 通过酶切酶连的方法将6×(IA2-P2)-His替换pET-28a-HSP65-6×P277中的6×P277,构建好的载体经DNA测序分析构建成功.乳糖诱导表达的蛋白经Ni+柱分离纯化.最后用SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白.结论 HSP65-6×(IA2-P2)-His最高表达量占菌体总蛋白的65%,超声破碎后蛋白以可溶性的形式存在于裂解上清中.Ni+柱纯化后蛋白纯度可达80%电泳纯以上.最后Western blot鉴定目的蛋白具有抗原性和His标签.结论 重组载体pET-28a-HSP65-6×(IA2-P2)-His成功转入BL21中,以可溶性的形式高效表达,该工作为进一步验证融合蛋白的生物学活性奠定了一定的基础.
    목적 구건HSP65-6×(IA2-P2)-His표체재체병연구기재대장간균중적표체급분리순화.방법 통과매절매련적방법장6×(IA2-P2)-His체환pET-28a-HSP65-6×P277중적6×P277,구건호적재체경DNA측서분석구건성공.유당유도표체적단백경Ni+주분리순화.최후용SDS-PAGE급Western blot감정목적단백.결론 HSP65-6×(IA2-P2)-His최고표체량점균체총단백적65%,초성파쇄후단백이가용성적형식존재우렬해상청중.Ni+주순화후단백순도가체80%전영순이상.최후Western blot감정목적단백구유항원성화His표첨.결론 중조재체pET-28a-HSP65-6×(IA2-P2)-His성공전입BL21중,이가용성적형식고효표체,해공작위진일보험증융합단백적생물학활성전정료일정적기출.
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