中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2014年
4期
255-260
,共6页
陈凌%郭盛%郝春莉%吴良霞%张建华
陳凌%郭盛%郝春莉%吳良霞%張建華
진릉%곽성%학춘리%오량하%장건화
白细胞介素-17F%肺炎球菌感染%β-防御素-2%巨噬细胞炎性蛋白
白細胞介素-17F%肺炎毬菌感染%β-防禦素-2%巨噬細胞炎性蛋白
백세포개소-17F%폐염구균감염%β-방어소-2%거서세포염성단백
Interleukin-17F%Streptococcus pneumoniae infection%β-defensin-2%Macrophage inflammatory protein
目的 通过动物实验观察重组融合蛋白白细胞介素(IL)-17F/His对肺炎链球菌(SP)感染小鼠β-防御素-2(Defb2)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)及IL-4、IFN-γ等免疫相关炎性因子表达的影响,探讨重组融合蛋白IL-17F/His在体内防御SP感染的机制.方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为SP感染组、重组融合蛋白干预组和正常对照组,以鼻腔黏膜接种方式建立SP感染模型,以鼻腔黏膜免疫方式进行重组蛋白免疫干预.采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织Defb2、MIP-1α和MIP-2β mRNA表达,酶联免疫吸附法测定小鼠肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞和纵隔淋巴结细胞培养上清中MIP-1 α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平,计数BALF中白细胞总数及分类,涂板培养行菌落计数,并对小鼠肺组织行免疫组织化学分析.结果 1.SP感染组小鼠BALF中白细胞总数158.50 ±22.27,中性粒细胞[(5.25±0.42)×106/L]、巨噬细胞[(149.00 ±21.09)×106/L]、淋巴细胞[(3.33±1.77)×106/L]计数均明显高于正常对照组[113.33±15.93、(2.33±0.82) ×106/L、(109.00 ±16.10)×106/L、(2.00 ±0.89)×106/L](U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均＜0.05).与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组小鼠BALF中SP的定植密度[2.75(1.15～3.09)×103/L]明显降低(P=0.002),白细胞总数(209.00±18.23)及中性粒细胞[(8.67 ±2.16)×106/L]、巨噬细胞[(193.50±16.50)×106/L]、淋巴细胞[(6.83±1.17) ×106/L]计数均明显升高(U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均＜0.05).2.与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组小鼠肺组织中Defb2 mRNA表达水平(31.64±4.97)和MIP-1α mRNA表达水平(5.81±1.09)均明显升高,MIP-2β mRNA表达水平(6.69 ±2.05)明显降低(t=4.889、2.306、3.536,P均＜0.05).3.SP感染后小鼠BALF中MIP-1α、MIP-2β、IL-4、IFN-γ水平[(109.99±22.71)ng/L、(228.23 ±29.08)ng/L、(80.55±5.67) ng/L、(93.36 ±8.88) ng/L]均升高.与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组MIP-2β水平[(64.15±13.41) ng/L]明显降低,IL-4水平[(92.28±4.52) ng/L]明显升高(H/F=159.298、40.767,P均＜0.01).4.SP感染后小鼠脾细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平[(433.80 ±37.34) ng/L、(183.12±10.98) ng/L、(73.54 ±7.38) ng/L、(105.10±8.46) ng/L]均明显升高(P均＜0.05).与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组MIP-2β、IL-4水平[(255.02 ± 13.95) ng/L、(107.02±7.53) ng/L]明显升高,MIP-1α和IFN-γ水平[(413.61 ±24.23) ng/L、(98.88±5.84) ng/L]均明显降低(P均＜0.05).5.免疫组织化学结果显示重组融合蛋白干预组小鼠肺组织中IL-17F及Defb2表达均明显高于感染组,正常对照组未见阳性表达.结论 重组融合蛋白IL-17F/His黏膜免疫小鼠,可明显提高小鼠体内Defb2表达水平,并在基因和蛋白水平影响炎性因子表达,增加感染部位炎性细胞聚集,提高小鼠肺部SP的清除率,增强机体抗感染免疫能力.
目的 通過動物實驗觀察重組融閤蛋白白細胞介素(IL)-17F/His對肺炎鏈毬菌(SP)感染小鼠β-防禦素-2(Defb2)、巨噬細胞炎性蛋白(MIP)及IL-4、IFN-γ等免疫相關炎性因子錶達的影響,探討重組融閤蛋白IL-17F/His在體內防禦SP感染的機製.方法 SPF級BALB/c小鼠隨機分為SP感染組、重組融閤蛋白榦預組和正常對照組,以鼻腔黏膜接種方式建立SP感染模型,以鼻腔黏膜免疫方式進行重組蛋白免疫榦預.採用實時熒光定量PCR法檢測小鼠肺組織Defb2、MIP-1α和MIP-2β mRNA錶達,酶聯免疫吸附法測定小鼠肺泡灌洗液(BALF)、脾細胞和縱隔淋巴結細胞培養上清中MIP-1 α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平,計數BALF中白細胞總數及分類,塗闆培養行菌落計數,併對小鼠肺組織行免疫組織化學分析.結果 1.SP感染組小鼠BALF中白細胞總數158.50 ±22.27,中性粒細胞[(5.25±0.42)×106/L]、巨噬細胞[(149.00 ±21.09)×106/L]、淋巴細胞[(3.33±1.77)×106/L]計數均明顯高于正常對照組[113.33±15.93、(2.33±0.82) ×106/L、(109.00 ±16.10)×106/L、(2.00 ±0.89)×106/L](U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均＜0.05).與SP感染組比較,重組融閤蛋白榦預組小鼠BALF中SP的定植密度[2.75(1.15～3.09)×103/L]明顯降低(P=0.002),白細胞總數(209.00±18.23)及中性粒細胞[(8.67 ±2.16)×106/L]、巨噬細胞[(193.50±16.50)×106/L]、淋巴細胞[(6.83±1.17) ×106/L]計數均明顯升高(U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均＜0.05).2.與SP感染組比較,重組融閤蛋白榦預組小鼠肺組織中Defb2 mRNA錶達水平(31.64±4.97)和MIP-1α mRNA錶達水平(5.81±1.09)均明顯升高,MIP-2β mRNA錶達水平(6.69 ±2.05)明顯降低(t=4.889、2.306、3.536,P均＜0.05).3.SP感染後小鼠BALF中MIP-1α、MIP-2β、IL-4、IFN-γ水平[(109.99±22.71)ng/L、(228.23 ±29.08)ng/L、(80.55±5.67) ng/L、(93.36 ±8.88) ng/L]均升高.與SP感染組比較,重組融閤蛋白榦預組MIP-2β水平[(64.15±13.41) ng/L]明顯降低,IL-4水平[(92.28±4.52) ng/L]明顯升高(H/F=159.298、40.767,P均＜0.01).4.SP感染後小鼠脾細胞培養上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平[(433.80 ±37.34) ng/L、(183.12±10.98) ng/L、(73.54 ±7.38) ng/L、(105.10±8.46) ng/L]均明顯升高(P均＜0.05).與SP感染組比較,重組融閤蛋白榦預組MIP-2β、IL-4水平[(255.02 ± 13.95) ng/L、(107.02±7.53) ng/L]明顯升高,MIP-1α和IFN-γ水平[(413.61 ±24.23) ng/L、(98.88±5.84) ng/L]均明顯降低(P均＜0.05).5.免疫組織化學結果顯示重組融閤蛋白榦預組小鼠肺組織中IL-17F及Defb2錶達均明顯高于感染組,正常對照組未見暘性錶達.結論 重組融閤蛋白IL-17F/His黏膜免疫小鼠,可明顯提高小鼠體內Defb2錶達水平,併在基因和蛋白水平影響炎性因子錶達,增加感染部位炎性細胞聚集,提高小鼠肺部SP的清除率,增彊機體抗感染免疫能力.
목적 통과동물실험관찰중조융합단백백세포개소(IL)-17F/His대폐염련구균(SP)감염소서β-방어소-2(Defb2)、거서세포염성단백(MIP)급IL-4、IFN-γ등면역상관염성인자표체적영향,탐토중조융합단백IL-17F/His재체내방어SP감염적궤제.방법 SPF급BALB/c소서수궤분위SP감염조、중조융합단백간예조화정상대조조,이비강점막접충방식건립SP감염모형,이비강점막면역방식진행중조단백면역간예.채용실시형광정량PCR법검측소서폐조직Defb2、MIP-1α화MIP-2β mRNA표체,매련면역흡부법측정소서폐포관세액(BALF)、비세포화종격림파결세포배양상청중MIP-1 α、MIP-2β、IL-4급IFN-γ수평,계수BALF중백세포총수급분류,도판배양행균락계수,병대소서폐조직행면역조직화학분석.결과 1.SP감염조소서BALF중백세포총수158.50 ±22.27,중성립세포[(5.25±0.42)×106/L]、거서세포[(149.00 ±21.09)×106/L]、림파세포[(3.33±1.77)×106/L]계수균명현고우정상대조조[113.33±15.93、(2.33±0.82) ×106/L、(109.00 ±16.10)×106/L、(2.00 ±0.89)×106/L](U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P균＜0.05).여SP감염조비교,중조융합단백간예조소서BALF중SP적정식밀도[2.75(1.15～3.09)×103/L]명현강저(P=0.002),백세포총수(209.00±18.23)급중성립세포[(8.67 ±2.16)×106/L]、거서세포[(193.50±16.50)×106/L]、림파세포[(6.83±1.17) ×106/L]계수균명현승고(U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P균＜0.05).2.여SP감염조비교,중조융합단백간예조소서폐조직중Defb2 mRNA표체수평(31.64±4.97)화MIP-1α mRNA표체수평(5.81±1.09)균명현승고,MIP-2β mRNA표체수평(6.69 ±2.05)명현강저(t=4.889、2.306、3.536,P균＜0.05).3.SP감염후소서BALF중MIP-1α、MIP-2β、IL-4、IFN-γ수평[(109.99±22.71)ng/L、(228.23 ±29.08)ng/L、(80.55±5.67) ng/L、(93.36 ±8.88) ng/L]균승고.여SP감염조비교,중조융합단백간예조MIP-2β수평[(64.15±13.41) ng/L]명현강저,IL-4수평[(92.28±4.52) ng/L]명현승고(H/F=159.298、40.767,P균＜0.01).4.SP감염후소서비세포배양상청중MIP-1α、MIP-2β、IL-4급IFN-γ수평[(433.80 ±37.34) ng/L、(183.12±10.98) ng/L、(73.54 ±7.38) ng/L、(105.10±8.46) ng/L]균명현승고(P균＜0.05).여SP감염조비교,중조융합단백간예조MIP-2β、IL-4수평[(255.02 ± 13.95) ng/L、(107.02±7.53) ng/L]명현승고,MIP-1α화IFN-γ수평[(413.61 ±24.23) ng/L、(98.88±5.84) ng/L]균명현강저(P균＜0.05).5.면역조직화학결과현시중조융합단백간예조소서폐조직중IL-17F급Defb2표체균명현고우감염조,정상대조조미견양성표체.결론 중조융합단백IL-17F/His점막면역소서,가명현제고소서체내Defb2표체수평,병재기인화단백수평영향염성인자표체,증가감염부위염성세포취집,제고소서폐부SP적청제솔,증강궤체항감염면역능력.
