化工学报
化工學報
화공학보
JOURNAL OF CHEMICAL INDUSY AND ENGINEERING (CHINA)
2014年
4期
1374-1380
,共7页
张彭湃%胡升%梅乐和%雷引林%金志华%姚善泾
張彭湃%鬍升%梅樂和%雷引林%金誌華%姚善涇
장팽배%호승%매악화%뢰인림%금지화%요선경
生物催化%酶%分子生物学%P450 BM-3%吲哚%羟基化%靛蓝
生物催化%酶%分子生物學%P450 BM-3%吲哚%羥基化%靛藍
생물최화%매%분자생물학%P450 BM-3%신타%간기화%전람
bio-catalysis%enzyme%molecular biology%P450 BM-3%indole%hydroxylation%indigo
为进一步提高P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的能力,在前期获得的突变酶D168L/E435T基础上引入V445A突变,获得突变酶D 168L/E435T/V445A,该突变酶与D168L/E435T及V445A相比,对吲哚的亲和力分别降低41.5％及35.8％,转化数(tcat)分别提高1.61倍及1.31倍,催化效率(kcatKm-1)分别提高1.53倍及1.47倍;该突变酶对电子的耦合率也提高至24.7％,较D168L/E435T提高39.5％,较V445A提高64.7％,说明该突变酶在电子的利用率上有明显改善;此外,该突变酶催化副产物靛玉红的比例大幅降低,降低为D168L/E435T的41.7％及V445A的30.6％,说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更加有利于靛蓝形成.
為進一步提高P450 BM-3催化吲哚閤成靛藍的能力,在前期穫得的突變酶D168L/E435T基礎上引入V445A突變,穫得突變酶D 168L/E435T/V445A,該突變酶與D168L/E435T及V445A相比,對吲哚的親和力分彆降低41.5％及35.8％,轉化數(tcat)分彆提高1.61倍及1.31倍,催化效率(kcatKm-1)分彆提高1.53倍及1.47倍;該突變酶對電子的耦閤率也提高至24.7％,較D168L/E435T提高39.5％,較V445A提高64.7％,說明該突變酶在電子的利用率上有明顯改善;此外,該突變酶催化副產物靛玉紅的比例大幅降低,降低為D168L/E435T的41.7％及V445A的30.6％,說明該突變酶催化吲哚的區域選擇性上也更加有利于靛藍形成.
위진일보제고P450 BM-3최화신타합성전람적능력,재전기획득적돌변매D168L/E435T기출상인입V445A돌변,획득돌변매D 168L/E435T/V445A,해돌변매여D168L/E435T급V445A상비,대신타적친화력분별강저41.5％급35.8％,전화수(tcat)분별제고1.61배급1.31배,최화효솔(kcatKm-1)분별제고1.53배급1.47배;해돌변매대전자적우합솔야제고지24.7％,교D168L/E435T제고39.5％,교V445A제고64.7％,설명해돌변매재전자적이용솔상유명현개선;차외,해돌변매최화부산물전옥홍적비례대폭강저,강저위D168L/E435T적41.7％급V445A적30.6％,설명해돌변매최화신타적구역선택성상야경가유리우전람형성.
