中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
2期
200-206
,共7页
刘岩%潘云峰%方霖楷%郭欣%吴云婷
劉巖%潘雲峰%方霖楷%郭訢%吳雲婷
류암%반운봉%방림해%곽흔%오운정
uPAR%类风湿关节炎%成纤维样滑膜细胞%RNA干扰%增殖%迁移%PI3K/AKT
uPAR%類風濕關節炎%成纖維樣滑膜細胞%RNA榦擾%增殖%遷移%PI3K/AKT
uPAR%류풍습관절염%성섬유양활막세포%RNA간우%증식%천이%PI3K/AKT
uPAR%arthritis/rheumatoid%fibroblast-like synoviocyte%RNA interference%proliferation%migration%PI3K/AKT
[目的]采用RNA干扰(RNAi)技术阻断类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因的表达,探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关机制.[方法]收集行关节置换术或滑膜清理术的RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA-FLS.通过阳离子脂质体转染的方法,转染体外合成的特异性uPAR-siRNA;利用荧光定量PCR法和Western blotting法检测uPAR沉默效果;CCK8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期改变;Transwell趋化小室测定细胞的迁移能力;Western blotting技术分析沉默uPAR基因对RA-FLS中PI3K/AKT通路的影响.[结果]uPAR-siRNA能有效阻断RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的表达.沉默uPAR基因后,细胞48、72、96 h增殖抑制率分别为(17.51±2.27)％、(28.62±4.82)％、(22.91±5.78)％,显著高于对照组(P＜ 0.05);uPAR-siRNA干扰后,被阻滞于G0/G1期的细胞增加,而S和G2/M期的细胞减少;Transwell趋化小室结果显示:与对照组相比,特异性干扰组的RA-FLS迁移细胞数(35±11)相比空白对照组(138±21)和NC-siRNA组(136±19)明显减少(P＜0.05);转染后的RA-FLS相对于对照组,PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平显著降低(P＜ 0.05).[结论]uPAR在RA-FLS的增殖、周期及迁移中起重要作用,这可能与其对PI3KAKT通路的激活有关.
[目的]採用RNA榦擾(RNAi)技術阻斷類風濕關節炎(RA)成纖維樣滑膜細胞(FLS)尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)基因的錶達,探討uPAR基因沉默後對RA-FLS功能產生的影響及有關機製.[方法]收集行關節置換術或滑膜清理術的RA患者的滑膜組織,組織塊法培養RA-FLS.通過暘離子脂質體轉染的方法,轉染體外閤成的特異性uPAR-siRNA;利用熒光定量PCR法和Western blotting法檢測uPAR沉默效果;CCK8法檢測細胞增殖抑製率;流式細胞技術檢測細胞週期改變;Transwell趨化小室測定細胞的遷移能力;Western blotting技術分析沉默uPAR基因對RA-FLS中PI3K/AKT通路的影響.[結果]uPAR-siRNA能有效阻斷RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的錶達.沉默uPAR基因後,細胞48、72、96 h增殖抑製率分彆為(17.51±2.27)％、(28.62±4.82)％、(22.91±5.78)％,顯著高于對照組(P＜ 0.05);uPAR-siRNA榦擾後,被阻滯于G0/G1期的細胞增加,而S和G2/M期的細胞減少;Transwell趨化小室結果顯示:與對照組相比,特異性榦擾組的RA-FLS遷移細胞數(35±11)相比空白對照組(138±21)和NC-siRNA組(136±19)明顯減少(P＜0.05);轉染後的RA-FLS相對于對照組,PI3K、AKT、GSK3β的燐痠化水平顯著降低(P＜ 0.05).[結論]uPAR在RA-FLS的增殖、週期及遷移中起重要作用,這可能與其對PI3KAKT通路的激活有關.
[목적]채용RNA간우(RNAi)기술조단류풍습관절염(RA)성섬유양활막세포(FLS)뇨격매형섬용매원격활물수체(uPAR)기인적표체,탐토uPAR기인침묵후대RA-FLS공능산생적영향급유관궤제.[방법]수집행관절치환술혹활막청리술적RA환자적활막조직,조직괴법배양RA-FLS.통과양리자지질체전염적방법,전염체외합성적특이성uPAR-siRNA;이용형광정량PCR법화Western blotting법검측uPAR침묵효과;CCK8법검측세포증식억제솔;류식세포기술검측세포주기개변;Transwell추화소실측정세포적천이능력;Western blotting기술분석침묵uPAR기인대RA-FLS중PI3K/AKT통로적영향.[결과]uPAR-siRNA능유효조단RA-FLS중uPAR기인재mRNA화단백수평상적표체.침묵uPAR기인후,세포48、72、96 h증식억제솔분별위(17.51±2.27)％、(28.62±4.82)％、(22.91±5.78)％,현저고우대조조(P＜ 0.05);uPAR-siRNA간우후,피조체우G0/G1기적세포증가,이S화G2/M기적세포감소;Transwell추화소실결과현시:여대조조상비,특이성간우조적RA-FLS천이세포수(35±11)상비공백대조조(138±21)화NC-siRNA조(136±19)명현감소(P＜0.05);전염후적RA-FLS상대우대조조,PI3K、AKT、GSK3β적린산화수평현저강저(P＜ 0.05).[결론]uPAR재RA-FLS적증식、주기급천이중기중요작용,저가능여기대PI3KAKT통로적격활유관.
