中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
2期
230-236
,共7页
罗嘉全%黄路%刘会文%韩智敏%邹学农%曹凯
囉嘉全%黃路%劉會文%韓智敏%鄒學農%曹凱
라가전%황로%류회문%한지민%추학농%조개
人骨髓间充质干细胞%长链非编码RNA%Smurf-1%成骨分化
人骨髓間充質榦細胞%長鏈非編碼RNA%Smurf-1%成骨分化
인골수간충질간세포%장련비편마RNA%Smurf-1%성골분화
hMSC%lncRNA%smurf-1%osteogenic differentiation
[目的]筛选和初步鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC)成骨分化相关的长链非编码RNA (lncRNA).[方法]利用Refeseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB 7.0,RNAdb 2.0,NRED生物软件分析成骨基因相关的lncRNA,综合获得可能的成骨相关lncRNA;3例骨髓标本来源于行腰椎手术患者,密度梯度法分离扩增hMSC后,分成骨诱导组和对照组,地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导hMSC成骨分化,通过ALP测定及钙结节茜素红染色进行成骨诱导鉴定;qRT-PCR验证hMSC成骨分化前、后差异表达的lncRNA,以及成骨分化前、后差异表达的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP.[结果]通过上述生物软件综合分析发现3个成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1周围存在相关lncRNA.4个lncRNA (AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)与成骨基因Smurf-1相关;2个lncRNA(AF289591和uc003xbe)与成骨基因BMP1相关;1个lncRNA (AK056311)与成骨基因MSX1相关.ALP检测示:与对照组细胞相比,成骨诱导组细胞1周ALP值最高,达到(16.82±1.64)nmol/min,随着诱导时间的延长,ALP值逐渐降低,3周降至(8.37±1.01)nmol/min.钙结节染色显示hMSC成骨诱导分化2周后胞外开始出现少量钙结节,随着诱导时间延长钙结节数量逐渐增加,成骨诱导至第3周钙结节最多,定量测定钙质量浓度达(716±49)mg/mL.RT-qPCR结果显示绝大部分lncRNA在hMSC成骨分化过程中表达均下调,其中2个与Smurf-1相关lncRNA(AK096529和uc003ups)与成骨诱导前相比,存在显著性下调.1个与MSX1相关的lncRNA(AK056311)与成骨诱导前相比,也存在显著性下调.同时,成骨分化基因Runx2、ALP表达显著性上调,MSX1、Smurf-1表达显著性下调.[结论]结合既往研究结果分析:AK096529和uc003ups可能通过正向调控Smurf1,促使Smurf1下调,减少Runx2的降解,继而促进hMSC的成骨分化.
[目的]篩選和初步鑒定人骨髓間充質榦細胞(hMSC)成骨分化相關的長鏈非編碼RNA (lncRNA).[方法]利用Refeseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB 7.0,RNAdb 2.0,NRED生物軟件分析成骨基因相關的lncRNA,綜閤穫得可能的成骨相關lncRNA;3例骨髓標本來源于行腰椎手術患者,密度梯度法分離擴增hMSC後,分成骨誘導組和對照組,地塞米鬆、維生素C、β-甘油燐痠鈉誘導hMSC成骨分化,通過ALP測定及鈣結節茜素紅染色進行成骨誘導鑒定;qRT-PCR驗證hMSC成骨分化前、後差異錶達的lncRNA,以及成骨分化前、後差異錶達的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP.[結果]通過上述生物軟件綜閤分析髮現3箇成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1週圍存在相關lncRNA.4箇lncRNA (AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)與成骨基因Smurf-1相關;2箇lncRNA(AF289591和uc003xbe)與成骨基因BMP1相關;1箇lncRNA (AK056311)與成骨基因MSX1相關.ALP檢測示:與對照組細胞相比,成骨誘導組細胞1週ALP值最高,達到(16.82±1.64)nmol/min,隨著誘導時間的延長,ALP值逐漸降低,3週降至(8.37±1.01)nmol/min.鈣結節染色顯示hMSC成骨誘導分化2週後胞外開始齣現少量鈣結節,隨著誘導時間延長鈣結節數量逐漸增加,成骨誘導至第3週鈣結節最多,定量測定鈣質量濃度達(716±49)mg/mL.RT-qPCR結果顯示絕大部分lncRNA在hMSC成骨分化過程中錶達均下調,其中2箇與Smurf-1相關lncRNA(AK096529和uc003ups)與成骨誘導前相比,存在顯著性下調.1箇與MSX1相關的lncRNA(AK056311)與成骨誘導前相比,也存在顯著性下調.同時,成骨分化基因Runx2、ALP錶達顯著性上調,MSX1、Smurf-1錶達顯著性下調.[結論]結閤既往研究結果分析:AK096529和uc003ups可能通過正嚮調控Smurf1,促使Smurf1下調,減少Runx2的降解,繼而促進hMSC的成骨分化.
[목적]사선화초보감정인골수간충질간세포(hMSC)성골분화상관적장련비편마RNA (lncRNA).[방법]이용Refeseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB 7.0,RNAdb 2.0,NRED생물연건분석성골기인상관적lncRNA,종합획득가능적성골상관lncRNA;3례골수표본래원우행요추수술환자,밀도제도법분리확증hMSC후,분성골유도조화대조조,지새미송、유생소C、β-감유린산납유도hMSC성골분화,통과ALP측정급개결절천소홍염색진행성골유도감정;qRT-PCR험증hMSC성골분화전、후차이표체적lncRNA,이급성골분화전、후차이표체적기인BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP.[결과]통과상술생물연건종합분석발현3개성골기인MSX1、BMP1화Smurf1주위존재상관lncRNA.4개lncRNA (AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)여성골기인Smurf-1상관;2개lncRNA(AF289591화uc003xbe)여성골기인BMP1상관;1개lncRNA (AK056311)여성골기인MSX1상관.ALP검측시:여대조조세포상비,성골유도조세포1주ALP치최고,체도(16.82±1.64)nmol/min,수착유도시간적연장,ALP치축점강저,3주강지(8.37±1.01)nmol/min.개결절염색현시hMSC성골유도분화2주후포외개시출현소량개결절,수착유도시간연장개결절수량축점증가,성골유도지제3주개결절최다,정량측정개질량농도체(716±49)mg/mL.RT-qPCR결과현시절대부분lncRNA재hMSC성골분화과정중표체균하조,기중2개여Smurf-1상관lncRNA(AK096529화uc003ups)여성골유도전상비,존재현저성하조.1개여MSX1상관적lncRNA(AK056311)여성골유도전상비,야존재현저성하조.동시,성골분화기인Runx2、ALP표체현저성상조,MSX1、Smurf-1표체현저성하조.[결론]결합기왕연구결과분석:AK096529화uc003ups가능통과정향조공Smurf1,촉사Smurf1하조,감소Runx2적강해,계이촉진hMSC적성골분화.
