植物资源与环境学报
植物資源與環境學報
식물자원여배경학보
JOURNAL OF PLANT RESOURCES AND ENVIRONMENT
2013年
4期
38-43
,共6页
程国山%游新才%武艳%张今今
程國山%遊新纔%武豔%張今今
정국산%유신재%무염%장금금
茶树%抗寒性%DDRT-PCR%低温胁迫%基因差异表达%谷氨酰胺合成酶基因片段
茶樹%抗寒性%DDRT-PCR%低溫脅迫%基因差異錶達%穀氨酰胺閤成酶基因片段
다수%항한성%DDRT-PCR%저온협박%기인차이표체%곡안선알합성매기인편단
Camellia sinensis (Linn.) O.Ktze.%cold-resistance%DDRT-PCR%low temperature stress%gene differential expression%glutamine synthetase gene segment
采用DDRT-PCR技术,对低温(4℃)胁迫处理不同时间(0、8、12、24和48 h)后茶树[Camellia sinensis(Linn.)O.Ktze.]抗寒品种‘紫阳圆叶’(‘Ziyangyuanye’)叶片中差异表达的基因进行分离和测序,并采用半定量RT-PCR对差异表达基因的表达特性进行了比较.结果表明:有12个引物对扩增出有明显差异的cDNA片段,其中3个片段是与抗寒性相关的差异片段,分别被命名为Csgsf、Cscaf1和Cscaf2,碱基数分别为217、316和232 bp.比对结果显示:Csgsf与茶树品种‘安吉白茶’(‘Anjibaicha’)和‘龙井43’(‘Longjing 43’)的谷氨酰胺合成酶基因的同源性分别为96％和91％,与菜豆(Phaseolus vulgaris Linn.)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula Gaertn.)、油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、西洋参(Panax quinquefolius Linn.)和水稻(Oryza sativa Linn.)等植物的谷氨酰胺合成酶的基因序列同源性均达到90％以上,因此,Csgsf应为茶树谷氨酰胺合成酶基因片段;Cscaf2与干旱胁迫条件下茶树表达的cDNA的同源性为100％,为茶树应答干旱和低温胁迫的基因片段;Cscaf1未检索出同源序列,推测其为与冷胁迫相关的未知基因片段.半定量RT-PCR分析结果表明:Csgsf和Cscaf1在低温胁迫的初始期即开始表达且表达量随低温胁迫时间延长逐渐下调;而Cscaf2的表达量随低温胁迫时间延长逐渐上调并在胁迫48 h后达到最大,3个片段的表达特性均与差异扩增结果相符.
採用DDRT-PCR技術,對低溫(4℃)脅迫處理不同時間(0、8、12、24和48 h)後茶樹[Camellia sinensis(Linn.)O.Ktze.]抗寒品種‘紫暘圓葉’(‘Ziyangyuanye’)葉片中差異錶達的基因進行分離和測序,併採用半定量RT-PCR對差異錶達基因的錶達特性進行瞭比較.結果錶明:有12箇引物對擴增齣有明顯差異的cDNA片段,其中3箇片段是與抗寒性相關的差異片段,分彆被命名為Csgsf、Cscaf1和Cscaf2,堿基數分彆為217、316和232 bp.比對結果顯示:Csgsf與茶樹品種‘安吉白茶’(‘Anjibaicha’)和‘龍井43’(‘Longjing 43’)的穀氨酰胺閤成酶基因的同源性分彆為96％和91％,與菜豆(Phaseolus vulgaris Linn.)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula Gaertn.)、油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、西洋參(Panax quinquefolius Linn.)和水稻(Oryza sativa Linn.)等植物的穀氨酰胺閤成酶的基因序列同源性均達到90％以上,因此,Csgsf應為茶樹穀氨酰胺閤成酶基因片段;Cscaf2與榦旱脅迫條件下茶樹錶達的cDNA的同源性為100％,為茶樹應答榦旱和低溫脅迫的基因片段;Cscaf1未檢索齣同源序列,推測其為與冷脅迫相關的未知基因片段.半定量RT-PCR分析結果錶明:Csgsf和Cscaf1在低溫脅迫的初始期即開始錶達且錶達量隨低溫脅迫時間延長逐漸下調;而Cscaf2的錶達量隨低溫脅迫時間延長逐漸上調併在脅迫48 h後達到最大,3箇片段的錶達特性均與差異擴增結果相符.
채용DDRT-PCR기술,대저온(4℃)협박처리불동시간(0、8、12、24화48 h)후다수[Camellia sinensis(Linn.)O.Ktze.]항한품충‘자양원협’(‘Ziyangyuanye’)협편중차이표체적기인진행분리화측서,병채용반정량RT-PCR대차이표체기인적표체특성진행료비교.결과표명:유12개인물대확증출유명현차이적cDNA편단,기중3개편단시여항한성상관적차이편단,분별피명명위Csgsf、Cscaf1화Cscaf2,감기수분별위217、316화232 bp.비대결과현시:Csgsf여다수품충‘안길백다’(‘Anjibaicha’)화‘룡정43’(‘Longjing 43’)적곡안선알합성매기인적동원성분별위96％화91％,여채두(Phaseolus vulgaris Linn.)、질려목숙(Medicago truncatula Gaertn.)、유종(Elaeis guineensis Jacq.)、서양삼(Panax quinquefolius Linn.)화수도(Oryza sativa Linn.)등식물적곡안선알합성매적기인서렬동원성균체도90％이상,인차,Csgsf응위다수곡안선알합성매기인편단;Cscaf2여간한협박조건하다수표체적cDNA적동원성위100％,위다수응답간한화저온협박적기인편단;Cscaf1미검색출동원서렬,추측기위여랭협박상관적미지기인편단.반정량RT-PCR분석결과표명:Csgsf화Cscaf1재저온협박적초시기즉개시표체차표체량수저온협박시간연장축점하조;이Cscaf2적표체량수저온협박시간연장축점상조병재협박48 h후체도최대,3개편단적표체특성균여차이확증결과상부.
