畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
11期
1766-1774
,共9页
赵娜%甄林青%胡启蒙%王亮亮%李新红
趙娜%甄林青%鬍啟矇%王亮亮%李新紅
조나%견림청%호계몽%왕량량%리신홍
低温保存%似凋亡%线粒体膜电位%精子%猪
低溫保存%似凋亡%線粒體膜電位%精子%豬
저온보존%사조망%선립체막전위%정자%저
cryopreservation%apoptosis-like%mitochondrial membrane potential%sperm%boar
测定超低温冷冻保存过程能否诱导猪冻融精子产生“似凋亡”变化,探讨猪冻融精子活力降低的分子机理.利用Annexin-V/PI及JC-1荧光抗体试剂盒与流式细胞术相结合的方法,检测猪精子冷冻前后及不同培养时间冻融精子质膜中磷脂酰丝氨酸(PS)位置及线粒体膜电位(△ψm)变化;蛋白免疫印迹分析方法测定猪精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等“凋亡”因子含量变化.猪精子超低温冷冻保存后活性精子的比例(54.4％)显著低于鲜精组(87.9％)(P＜0.05),其中PS移位的精子“似凋亡”比例约为26.8％,同鲜精组(5.6％)相比增加21.2个百分点(P＜0.05);降温平衡及冷冻复苏后猪精子线粒体膜电位变化显著,其中低△ψm精子比例显著增加(P＜0.05);同新鲜精子(19.6％)相比,冷冻复苏后(79.4％)低△ψm精子比例提高59.8个百分点(P＜0.05);冻融精子中Bcl 2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性显著高于鲜精子及降温平衡后的精子(P＜0.05),由此证明冻融过程能诱导猪精子进入凋亡状态.超低温冷冻保存能导致猪冻融精子质膜磷脂酰丝氨酸(PS)移位及线粒体膜电位降低,同时激发精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性,诱导成活冻融精子提前进入“似凋亡”状态,明显缩短冻融精子存活时间,这可能是猪冻精繁殖力降低的又一诱因.
測定超低溫冷凍保存過程能否誘導豬凍融精子產生“似凋亡”變化,探討豬凍融精子活力降低的分子機理.利用Annexin-V/PI及JC-1熒光抗體試劑盒與流式細胞術相結閤的方法,檢測豬精子冷凍前後及不同培養時間凍融精子質膜中燐脂酰絲氨痠(PS)位置及線粒體膜電位(△ψm)變化;蛋白免疫印跡分析方法測定豬精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等“凋亡”因子含量變化.豬精子超低溫冷凍保存後活性精子的比例(54.4％)顯著低于鮮精組(87.9％)(P＜0.05),其中PS移位的精子“似凋亡”比例約為26.8％,同鮮精組(5.6％)相比增加21.2箇百分點(P＜0.05);降溫平衡及冷凍複囌後豬精子線粒體膜電位變化顯著,其中低△ψm精子比例顯著增加(P＜0.05);同新鮮精子(19.6％)相比,冷凍複囌後(79.4％)低△ψm精子比例提高59.8箇百分點(P＜0.05);凍融精子中Bcl 2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性顯著高于鮮精子及降溫平衡後的精子(P＜0.05),由此證明凍融過程能誘導豬精子進入凋亡狀態.超低溫冷凍保存能導緻豬凍融精子質膜燐脂酰絲氨痠(PS)移位及線粒體膜電位降低,同時激髮精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性,誘導成活凍融精子提前進入“似凋亡”狀態,明顯縮短凍融精子存活時間,這可能是豬凍精繁殖力降低的又一誘因.
측정초저온냉동보존과정능부유도저동융정자산생“사조망”변화,탐토저동융정자활력강저적분자궤리.이용Annexin-V/PI급JC-1형광항체시제합여류식세포술상결합적방법,검측저정자냉동전후급불동배양시간동융정자질막중린지선사안산(PS)위치급선립체막전위(△ψm)변화;단백면역인적분석방법측정저정자Bcl-2、Caspase-9급Caspase-3등“조망”인자함량변화.저정자초저온냉동보존후활성정자적비례(54.4％)현저저우선정조(87.9％)(P＜0.05),기중PS이위적정자“사조망”비례약위26.8％,동선정조(5.6％)상비증가21.2개백분점(P＜0.05);강온평형급냉동복소후저정자선립체막전위변화현저,기중저△ψm정자비례현저증가(P＜0.05);동신선정자(19.6％)상비,냉동복소후(79.4％)저△ψm정자비례제고59.8개백분점(P＜0.05);동융정자중Bcl 2、Caspase-9급Caspase-3등조망인자활성현저고우선정자급강온평형후적정자(P＜0.05),유차증명동융과정능유도저정자진입조망상태.초저온냉동보존능도치저동융정자질막린지선사안산(PS)이위급선립체막전위강저,동시격발정자Bcl-2、Caspase-9급Caspase-3등조망인자활성,유도성활동융정자제전진입“사조망”상태,명현축단동융정자존활시간,저가능시저동정번식력강저적우일유인.
