畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
11期
1734-1738
,共5页
邹丹丹%杨东%姜立春%邹方东
鄒丹丹%楊東%薑立春%鄒方東
추단단%양동%강립춘%추방동
林麝%IL-1β%原核表达%蛋白纯化%活性检测
林麝%IL-1β%原覈錶達%蛋白純化%活性檢測
림사%IL-1β%원핵표체%단백순화%활성검측
Moschus berezovskii%IL-1β%prokaryotic expression%purification%activity detection
旨在克隆和表达林麝IL-1β,为其用于林麝疾病的防治奠定基础.从林麝外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增IL-1β(Interleukin-1β)基因.将IL-1β成熟肽编码序列连接到pET32a(+)原核表达载体进行表达,纯化目的蛋白并检测其生物学活性.序列分析表明,林麝IL-1β开放阅读框(ORF)长801 bp,编码266个氨基酸,且在反刍动物中高度保守.IPTG诱导林麝IL-1β融合蛋白(MB-rIL-1β)表达,得到约35 ku的目标带,且大部分以可溶形式存在.对上清蛋白分离纯化得到约35 ku的单一条带.细胞增殖试验结果显示,林麝IL-1β融合蛋白能明显促进小鼠成纤维细胞(L929)增殖,表明其具有生物学活性.运用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达具有生物学活性的MB-rIL-1β融合蛋白.
旨在剋隆和錶達林麝IL-1β,為其用于林麝疾病的防治奠定基礎.從林麝外週血單覈細胞中提取總RNA,RT-PCR擴增IL-1β(Interleukin-1β)基因.將IL-1β成熟肽編碼序列連接到pET32a(+)原覈錶達載體進行錶達,純化目的蛋白併檢測其生物學活性.序列分析錶明,林麝IL-1β開放閱讀框(ORF)長801 bp,編碼266箇氨基痠,且在反芻動物中高度保守.IPTG誘導林麝IL-1β融閤蛋白(MB-rIL-1β)錶達,得到約35 ku的目標帶,且大部分以可溶形式存在.對上清蛋白分離純化得到約35 ku的單一條帶.細胞增殖試驗結果顯示,林麝IL-1β融閤蛋白能明顯促進小鼠成纖維細胞(L929)增殖,錶明其具有生物學活性.運用大腸桿菌錶達繫統可高效可溶性錶達具有生物學活性的MB-rIL-1β融閤蛋白.
지재극륭화표체림사IL-1β,위기용우림사질병적방치전정기출.종림사외주혈단핵세포중제취총RNA,RT-PCR확증IL-1β(Interleukin-1β)기인.장IL-1β성숙태편마서렬련접도pET32a(+)원핵표체재체진행표체,순화목적단백병검측기생물학활성.서렬분석표명,림사IL-1β개방열독광(ORF)장801 bp,편마266개안기산,차재반추동물중고도보수.IPTG유도림사IL-1β융합단백(MB-rIL-1β)표체,득도약35 ku적목표대,차대부분이가용형식존재.대상청단백분리순화득도약35 ku적단일조대.세포증식시험결과현시,림사IL-1β융합단백능명현촉진소서성섬유세포(L929)증식,표명기구유생물학활성.운용대장간균표체계통가고효가용성표체구유생물학활성적MB-rIL-1β융합단백.
