北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2014年
2期
190-194
,共5页
石岩岩%丁士刚%张婷%鲁凤民%张静%王晔
石巖巖%丁士剛%張婷%魯鳳民%張靜%王曄
석암암%정사강%장정%로봉민%장정%왕엽
幽门螺杆菌%硫氧还蛋白质类%重组蛋白质类%遗传载体
幽門螺桿菌%硫氧還蛋白質類%重組蛋白質類%遺傳載體
유문라간균%류양환단백질류%중조단백질류%유전재체
Helicobacter pylori%Thioredoxins%Recombinant proteins%Genetic vectors
目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,构建含有该目的基因的原核细胞表达载体,表达纯化该蛋白,并检测该蛋白活性.方法:以Hp国际标准菌株26695的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法扩增Hp Trx1的cDNA,连接至pEASY-T1载体构建成pEASY-T1-Hp Trx1.对pEASY-T1-Hp Trx1进行双酶切后将目的片段连接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重组质粒,并在大肠杆菌BL21 plys S中进行表达.应用镍柱亲和层析纯化重组的Hp Trx1蛋白,并检测其二硫键还原酶的活性.结果:测序结果显示Hp Trx1 cDNA成功连入pET-30a质粒,且与GenBank(HP0824)完全一致.含质粒pET-30a-Hp Trx1的大肠杆菌BL21 plys S成功表达出Hp Trx1蛋白,活性检测显示重组Hp Trx1蛋白具有二硫键还原酶的活性.结论:成功构建原核表达载体pET-30a-Hp Trx1,并表达、纯化出有活性的Hp Trx1蛋白,为进一步研究Hp Trx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础.
目的:剋隆幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧還蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,構建含有該目的基因的原覈細胞錶達載體,錶達純化該蛋白,併檢測該蛋白活性.方法:以Hp國際標準菌株26695的總RNA為模闆,設計含有酶切位點的特異性引物,用逆轉錄PCR的方法擴增Hp Trx1的cDNA,連接至pEASY-T1載體構建成pEASY-T1-Hp Trx1.對pEASY-T1-Hp Trx1進行雙酶切後將目的片段連接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重組質粒,併在大腸桿菌BL21 plys S中進行錶達.應用鎳柱親和層析純化重組的Hp Trx1蛋白,併檢測其二硫鍵還原酶的活性.結果:測序結果顯示Hp Trx1 cDNA成功連入pET-30a質粒,且與GenBank(HP0824)完全一緻.含質粒pET-30a-Hp Trx1的大腸桿菌BL21 plys S成功錶達齣Hp Trx1蛋白,活性檢測顯示重組Hp Trx1蛋白具有二硫鍵還原酶的活性.結論:成功構建原覈錶達載體pET-30a-Hp Trx1,併錶達、純化齣有活性的Hp Trx1蛋白,為進一步研究Hp Trx1的生物學活性及其對腫瘤髮生的作用機製奠定瞭基礎.
목적:극륭유문라간균(Helicobacter pylori,Hp)류양환단백-1(thioredoxin-1,Trx1)기인,구건함유해목적기인적원핵세포표체재체,표체순화해단백,병검측해단백활성.방법:이Hp국제표준균주26695적총RNA위모판,설계함유매절위점적특이성인물,용역전록PCR적방법확증Hp Trx1적cDNA,련접지pEASY-T1재체구건성pEASY-T1-Hp Trx1.대pEASY-T1-Hp Trx1진행쌍매절후장목적편단련접지pET-30a,형성pET-30a-Hp Trx1중조질립,병재대장간균BL21 plys S중진행표체.응용얼주친화층석순화중조적Hp Trx1단백,병검측기이류건환원매적활성.결과:측서결과현시Hp Trx1 cDNA성공련입pET-30a질립,차여GenBank(HP0824)완전일치.함질립pET-30a-Hp Trx1적대장간균BL21 plys S성공표체출Hp Trx1단백,활성검측현시중조Hp Trx1단백구유이류건환원매적활성.결론:성공구건원핵표체재체pET-30a-Hp Trx1,병표체、순화출유활성적Hp Trx1단백,위진일보연구Hp Trx1적생물학활성급기대종류발생적작용궤제전정료기출.
