Cry2A杀虫蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
Cry2A살충단백재대장간균중적표체급순화
Expression andpurification of Bacillus thuringiensis Cry2A insecticidal protein in E.coli
  • 万方数据
    上海农业学报 상해농업학보
    ACTA AGRICULTURAE SHANGHAI
    2013年 5期 10-14 ,共5页

    杨奇%韩芳婷%刘启文%蒋玲曦%谭芙蓉%吴潇%赵凯%王金斌%唐雪明

    양기%한방정%류계문%장령희%담부용%오소%조개%왕금빈%당설명

    转基因水稻%Cry2A杀虫蛋白%包涵体%表达%纯化 轉基因水稻%Cry2A殺蟲蛋白%包涵體%錶達%純化
    전기인수도%Cry2A살충단백%포함체%표체%순화
    Transgenic rice%Cry2A insecticidal protein%Inclusion body%Expression%Purification
    通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达.通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达.将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白.
    통과PCR방법종극륭재체상확증전기인수도중적항충기인cry2A,경한제성내절매EcoRI화BamHI쌍매절정향삽입도원핵표체재체pET-30a(+)중,성공구건료단백표체재체pET-30a(+)/Cry2A,병전입대장간균BL21 (DE3)중진행유도표체.통과대기표체조건진행우화,발현재IPTG농도위0.4 mmol/L、유도시간위6h、유도온도위30℃적표체조건하,목적단백표체량최고,대부분이포함체형식표체.장포함체렬해병용Ni-NTA친화주순화,소득순화단백재복성완충액중복성,최종득도유활성적고순도목적단백.
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