江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
5期
985-991
,共7页
徐重新%张霄%张存政%刘媛%谢雅晶%黄鹰%刘贤金
徐重新%張霄%張存政%劉媛%謝雅晶%黃鷹%劉賢金
서중신%장소%장존정%류원%사아정%황응%류현금
Cry1B毒素%单链抗体%真核表达系统%酶联免疫分析
Cry1B毒素%單鏈抗體%真覈錶達繫統%酶聯免疫分析
Cry1B독소%단련항체%진핵표체계통%매련면역분석
Cry1 B toxin%single-chain fragment variable (scFv) antibody%eukaryotic expression system%ELISA
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体(Bacmid-scFv)侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
通過構建pFastBacTM HT-A-scFv重組質粒,併將重組質粒化轉DH10BacTM Escherichia coli感受態細胞,進行藍白斑篩選,穫得暘性剋隆.PCR和基因測序檢測證實挑取的白斑暘性單剋隆存在完整、正確的單鏈抗體基因.提取暘性剋隆中的重組桿狀病毒穿梭載體(Bacmid-scFv)侵染sf9昆蟲細胞,細胞髮生明顯病變特徵.通過SDS-PAGE、Western blotting和間接競爭性ELISA等方法檢測,髮現單鏈抗體在sf9昆蟲細胞中錶達成功,測得純化後蛋白濃度為103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素對單鏈抗體的抑製中濃度(IC50)為1.010 0 μg/ml,最低檢測線IC10為0.011 3μg/ml,線性檢測範圍為0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv對抗原類似物無交扠反應.
통과구건pFastBacTM HT-A-scFv중조질립,병장중조질립화전DH10BacTM Escherichia coli감수태세포,진행람백반사선,획득양성극륭.PCR화기인측서검측증실도취적백반양성단극륭존재완정、정학적단련항체기인.제취양성극륭중적중조간상병독천사재체(Bacmid-scFv)침염sf9곤충세포,세포발생명현병변특정.통과SDS-PAGE、Western blotting화간접경쟁성ELISA등방법검측,발현단련항체재sf9곤충세포중표체성공,측득순화후단백농도위103.000 0 μg/ml,Cry1B독소대단련항체적억제중농도(IC50)위1.010 0 μg/ml,최저검측선IC10위0.011 3μg/ml,선성검측범위위0.500 0～10.000 0 μg/ml.가용성scFv대항원유사물무교차반응.
