解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
5期
616-620
,共5页
氧-糖剥夺%缺血性损伤%miR-181b%热休克蛋白A5%免疫印迹法%实时定量PCR%双荧光素酶报告基因分析%N2A细胞
氧-糖剝奪%缺血性損傷%miR-181b%熱休剋蛋白A5%免疫印跡法%實時定量PCR%雙熒光素酶報告基因分析%N2A細胞
양-당박탈%결혈성손상%miR-181b%열휴극단백A5%면역인적법%실시정량PCR%쌍형광소매보고기인분석%N2A세포
Oxygen-glucose deprivation%Ischemic injury%Micro RNA-181b%Heat shock protein A5%Western blotting%Real-time PCR%Dual luciferase reporter assays%N2A cell
目的 探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节.方法 应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用.结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR-181b前体(premiR-181b)或miR-181b抑制剂(anti-miR-181b)可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5).结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用.
目的 探討miR-181b在氧糖剝奪(OGD)緻N2As神經瘤細胞缺血損傷中的作用,及其對熱休剋蛋白(HSP)A5錶達的調節.方法 應用N2A細胞OGD模型模擬神經細胞缺血損傷,MTT比色法檢測N2A細胞生存率,免疫印跡法檢測HSPA5蛋白錶達水平,實時定量PCR法檢測miR-181b和HSPA5 mRNA錶達水平,熒光素酶報告基因技術檢測miR-181b對HSPA5 mRNA的直接調控作用.結果 miR-181b在OGD緻N2A細胞缺血損傷中錶達水平明顯降低(n=5);在OGD緻N2A細胞缺血損傷過程中,通過上調或抑製miR-181b的錶達水平可以顯著影響N2A細胞的生存率(n=6);而在非OGD條件下,miR-181b錶達水平的改變對N2A細胞活力無影響;miR-181b錶達水平的改變可顯著影響HSPA5蛋白錶達水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共轉染miR-181b前體(premiR-181b)或miR-181b抑製劑(anti-miR-181b)可顯著抑製或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的熒光素酶報告基因的活性(n=5).結論 miR-181b通過負性調節HSPA5的蛋白錶達水平,在OGD緻N2A神經細胞缺血性損傷中髮揮重要作用.
목적 탐토miR-181b재양당박탈(OGD)치N2As신경류세포결혈손상중적작용,급기대열휴극단백(HSP)A5표체적조절.방법 응용N2A세포OGD모형모의신경세포결혈손상,MTT비색법검측N2A세포생존솔,면역인적법검측HSPA5단백표체수평,실시정량PCR법검측miR-181b화HSPA5 mRNA표체수평,형광소매보고기인기술검측miR-181b대HSPA5 mRNA적직접조공작용.결과 miR-181b재OGD치N2A세포결혈손상중표체수평명현강저(n=5);재OGD치N2A세포결혈손상과정중,통과상조혹억제miR-181b적표체수평가이현저영향N2A세포적생존솔(n=6);이재비OGD조건하,miR-181b표체수평적개변대N2A세포활력무영향;miR-181b표체수평적개변가현저영향HSPA5단백표체수평(n=3),이비HSPA5적mRNA수평;공전염miR-181b전체(premiR-181b)혹miR-181b억제제(anti-miR-181b)가현저억제혹증고함유HSPA5 mRNA 3’-UTR적형광소매보고기인적활성(n=5).결론 miR-181b통과부성조절HSPA5적단백표체수평,재OGD치N2A신경세포결혈성손상중발휘중요작용.
