CAJ | 학술논문

肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)与肿瘤坏死因子受体(TNF receptor,TNFR)超家族在机体的先天免疫和获得性免疫方面都发挥重要作用.本研究从本实验室构建的大黄鱼(Larimichth ys crocea)EST(expressed sequence tag)数据库中筛选出TNFR(LcTNFR)基因片段,利用SMART-RACE技术克隆出大黄鱼Lc TNFR基因cDNA全序列,全长2 016 bp,其中5'非翻译区(untranslated region,UTR)64 bp,3'非翻译区602 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 350 bp.ORF编码449个氨基酸(GenBank登录号:KF432416).预测的蛋白质等电点为5.47,分子量为49.7 kD.对LcTNFR蛋白三维结构进行分析发现,其含有6个α螺旋,不含β折叠.Blast比对分析显示,与斑马宫丽鱼(May landia zebra)的TNFR 10B-like氨基酸序列一致性最高,达74％;与斑马鱼(Danio rerio)卵巢型TNFR一致性较高,达51％;与鲫鱼(Carassius auratus)TNFR Ⅰ的一致性为47％.鱼类TNFR进化树分析进一步表明,LcTNFR与TNFR 10B-like、TNFR Ⅰ及卵巢型TNFR聚为一大支.荧光定量PCR结果显示,TNFR基因在大黄鱼各组织中均有表达,在卵巢的表达水平最高,显著高于精巢及其它组织;其次在免疫相关组织脾脏也有较高的表达.副溶血弧菌(Vibrio parahaemol yticus)感染后的第2天和第4天,LcTNFR基因在大黄鱼脾脏组织中的表达量达到最高,显著高于对照组(P＜0.05),到第8天逐渐回落到对照组水平.本结果可为大黄鱼免疫学研究及抗病相关分子标记的开发提供参考依据.
종류배사인자(tumor necrosis factor,TNF)여종류배사인자수체(TNF receptor,TNFR)초가족재궤체적선천면역화획득성면역방면도발휘중요작용.본연구종본실험실구건적대황어(Larimichth ys crocea)EST(expressed sequence tag)수거고중사선출TNFR(LcTNFR)기인편단,이용SMART-RACE기술극륭출대황어Lc TNFR기인cDNA전서렬,전장2 016 bp,기중5'비번역구(untranslated region,UTR)64 bp,3'비번역구602 bp,개방열독광(open reading frame,ORF)1 350 bp.ORF편마449개안기산(GenBank등록호:KF432416).예측적단백질등전점위5.47,분자량위49.7 kD.대LcTNFR단백삼유결구진행분석발현,기함유6개α라선,불함β절첩.Blast비대분석현시,여반마궁려어(May landia zebra)적TNFR 10B-like안기산서렬일치성최고,체74％;여반마어(Danio rerio)란소형TNFR일치성교고,체51％;여즉어(Carassius auratus)TNFR Ⅰ적일치성위47％.어류TNFR진화수분석진일보표명,LcTNFR여TNFR 10B-like、TNFR Ⅰ급란소형TNFR취위일대지.형광정량PCR결과현시,TNFR기인재대황어각조직중균유표체,재란소적표체수평최고,현저고우정소급기타조직;기차재면역상관조직비장야유교고적표체.부용혈호균(Vibrio parahaemol yticus)감염후적제2천화제4천,LcTNFR기인재대황어비장조직중적표체량체도최고,현저고우대조조(P＜0.05),도제8천축점회락도대조조수평.본결과가위대황어면역학연구급항병상관분자표기적개발제공삼고의거.