CAJ | 학술논문

为了优化山定子(Malus baccata)遗传转化体系,利用DNA重组技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆到植物表达载体pBI121中,得到新型的重组质粒pBI 121-eGFP.重组pBI121-eGFP质粒在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105介导下转化山定子.结果表明,叶片切块后振荡侵染5～8min,共培养3d,之后用含有500 mg/L Cef的MS液体清洗后转移到含有300mg/LCef的筛选培养基中,同时卡那霉素的筛选浓度由5 mg/L加大到20 mg/L时,获得的转化效率较高.对体系优化过程中获得的7株抗性苗进行了PCR检测、RT-PCR分析、绿色荧光现象观察及荧光蛋白信号分析,结果显示,其中6株抗性苗PCR检测呈阳性,3个eGFP基因表达量较高的转基因株系T1、T3和T6的绿色荧光现象较强,且具有较高的荧光蛋白信号.荧光检测与分子检测结果基本一致,从而可以利用绿色荧光直接检测转基因植株,达到优化山定子遗传转化体系的目的.
위료우화산정자(Malus baccata)유전전화체계,이용DNA중조기술,장록색형광단백기인(GFP)극륭도식물표체재체pBI121중,득도신형적중조질립pBI 121-eGFP.중조pBI121-eGFP질립재근암농간균(Agrobacterium tumefaciens) EHA105개도하전화산정자.결과표명,협편절괴후진탕침염5～8min,공배양3d,지후용함유500 mg/L Cef적MS액체청세후전이도함유300mg/LCef적사선배양기중,동시잡나매소적사선농도유5 mg/L가대도20 mg/L시,획득적전화효솔교고.대체계우화과정중획득적7주항성묘진행료PCR검측、RT-PCR분석、록색형광현상관찰급형광단백신호분석,결과현시,기중6주항성묘PCR검측정양성,3개eGFP기인표체량교고적전기인주계T1、T3화T6적록색형광현상교강,차구유교고적형광단백신호.형광검측여분자검측결과기본일치,종이가이이용록색형광직접검측전기인식주,체도우화산정자유전전화체계적목적.