实用预防医学
實用預防醫學
실용예방의학
PRACTICAL PREVENTIVE MEDICINE
2014年
5期
543-546
,共4页
刘丽琦%余慧燕%于在江%舒跃龙
劉麗琦%餘慧燕%于在江%舒躍龍
류려기%여혜연%우재강%서약룡
禽流感病毒%血凝素%神经氨酸酶%杆状病毒表达系统%共表达
禽流感病毒%血凝素%神經氨痠酶%桿狀病毒錶達繫統%共錶達
금류감병독%혈응소%신경안산매%간상병독표체계통%공표체
Avian influenza%Hemagglutinin%Neuraminidase%Baculovirus expression system%Co-expression
目的 构建共表达H5N1禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白的杆状病毒表达系统.方法 利用PCR方法分别扩增A/Hubei/1/2010(H5N1)病毒的HA和NA基因,克隆至经改造带有对虾白斑综合病毒(wSSv)早期启动子iel的mpFastBac Dual载体,构建mpFast Bac-HA-NA表达质粒,转化DH10Bac感受态细胞,用获得的Bacmid-HA-NA穿梭质粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒Bac-HA-NA;提取重组杆状病毒Bac-HA-NA的DNA并使用PCR方法检测;利用Western blot检测HA和NA表达,并分别检测重组杆状病毒Bac-HA-NA红细胞凝集能力和神经氨酸酶活性.结果 经PCR鉴定,构建的质粒Bacmid-HA-NA正确;Western blot检测表明Bacmid-HA-NA能在sf9细胞中有效表达HA和NA蛋白,生物活性检测表明Bac-HA-NA能引起红细胞凝集并具有神经氨酸酶活性.结论 获得了能同时表达禽流感病毒HA和NA的重组杆状病毒Bac-HA-NA,为进一步研究流感疫苗奠定了基础.
目的 構建共錶達H5N1禽流感病毒血凝素(HA)和神經氨痠酶(NA)蛋白的桿狀病毒錶達繫統.方法 利用PCR方法分彆擴增A/Hubei/1/2010(H5N1)病毒的HA和NA基因,剋隆至經改造帶有對蝦白斑綜閤病毒(wSSv)早期啟動子iel的mpFastBac Dual載體,構建mpFast Bac-HA-NA錶達質粒,轉化DH10Bac感受態細胞,用穫得的Bacmid-HA-NA穿梭質粒轉染sf9細胞,穫得重組桿狀病毒Bac-HA-NA;提取重組桿狀病毒Bac-HA-NA的DNA併使用PCR方法檢測;利用Western blot檢測HA和NA錶達,併分彆檢測重組桿狀病毒Bac-HA-NA紅細胞凝集能力和神經氨痠酶活性.結果 經PCR鑒定,構建的質粒Bacmid-HA-NA正確;Western blot檢測錶明Bacmid-HA-NA能在sf9細胞中有效錶達HA和NA蛋白,生物活性檢測錶明Bac-HA-NA能引起紅細胞凝集併具有神經氨痠酶活性.結論 穫得瞭能同時錶達禽流感病毒HA和NA的重組桿狀病毒Bac-HA-NA,為進一步研究流感疫苗奠定瞭基礎.
목적 구건공표체H5N1금류감병독혈응소(HA)화신경안산매(NA)단백적간상병독표체계통.방법 이용PCR방법분별확증A/Hubei/1/2010(H5N1)병독적HA화NA기인,극륭지경개조대유대하백반종합병독(wSSv)조기계동자iel적mpFastBac Dual재체,구건mpFast Bac-HA-NA표체질립,전화DH10Bac감수태세포,용획득적Bacmid-HA-NA천사질립전염sf9세포,획득중조간상병독Bac-HA-NA;제취중조간상병독Bac-HA-NA적DNA병사용PCR방법검측;이용Western blot검측HA화NA표체,병분별검측중조간상병독Bac-HA-NA홍세포응집능력화신경안산매활성.결과 경PCR감정,구건적질립Bacmid-HA-NA정학;Western blot검측표명Bacmid-HA-NA능재sf9세포중유효표체HA화NA단백,생물활성검측표명Bac-HA-NA능인기홍세포응집병구유신경안산매활성.결론 획득료능동시표체금류감병독HA화NA적중조간상병독Bac-HA-NA,위진일보연구류감역묘전정료기출.
