农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
1期
1-9
,共9页
周平%何炜%金光%高玉娜%叶冰莹%陈由强%陈如凯
週平%何煒%金光%高玉娜%葉冰瑩%陳由彊%陳如凱
주평%하위%금광%고옥나%협빙형%진유강%진여개
甘蔗%蔗糖磷酸合成酶%基因组DNA序列%5'侧翼序列%GUS瞬时表达
甘蔗%蔗糖燐痠閤成酶%基因組DNA序列%5'側翼序列%GUS瞬時錶達
감자%자당린산합성매%기인조DNA서렬%5'측익서렬%GUS순시표체
Sugarcane%Sucrose phosphate synthase%Genomic DNA framents%5'-flanking sequence%Transient GUS expression
甘蔗是我国南方地区重要的糖料作物.为达到增糖的育种目标,对甘蔗蔗糖积累主要限速步骤的研究是必不可少的.蔗糖磷酸合成酶(SPS)作为蔗糖合成途径的关键限速酶,对甘蔗中蔗糖合成和碳水化合物分配有着重要的影响.本研究采用长距离PCR法(LD-PCR)克隆到两条不同长度的甘蔗(Saccharum spp.cv.FN95-1702)SPSⅢ基因组DNA片段.序列分析表明,所得的片段基因结构相同,均含有13个外显子和12个内含子,其开放读码框(ORE)编码964个氨基酸,序列提交GenBank,获得查询登陆号EU278617、EU278618.以此为基础,继续从甘蔗基因组中扩增出先前未知的SPSⅢ基因5’侧翼序列,申请GenBank登陆号KC422670.转录因子结合位点生物信息学分析表明,该序列含有顺式DNA作用元件和启动子TATA启动盒.为进一步验证5’侧翼序列的启动子活性,分别截取5段不同长度的SPSⅢ基因5’侧翼序列与报告基因GUS融合,构建嵌合基因表达载体质粒,基因枪微弹轰击甘蔗愈伤组织观测瞬时表达,证实了所克隆到的5’侧翼序列具有启动子活性,是甘蔗SPSⅢ基因的启动子,且具有一定的表达特性.本研究通过克隆分析SPSⅢ基因以其启动子,为研究基因结构和生物学功能提供了基础资料.
甘蔗是我國南方地區重要的糖料作物.為達到增糖的育種目標,對甘蔗蔗糖積纍主要限速步驟的研究是必不可少的.蔗糖燐痠閤成酶(SPS)作為蔗糖閤成途徑的關鍵限速酶,對甘蔗中蔗糖閤成和碳水化閤物分配有著重要的影響.本研究採用長距離PCR法(LD-PCR)剋隆到兩條不同長度的甘蔗(Saccharum spp.cv.FN95-1702)SPSⅢ基因組DNA片段.序列分析錶明,所得的片段基因結構相同,均含有13箇外顯子和12箇內含子,其開放讀碼框(ORE)編碼964箇氨基痠,序列提交GenBank,穫得查詢登陸號EU278617、EU278618.以此為基礎,繼續從甘蔗基因組中擴增齣先前未知的SPSⅢ基因5’側翼序列,申請GenBank登陸號KC422670.轉錄因子結閤位點生物信息學分析錶明,該序列含有順式DNA作用元件和啟動子TATA啟動盒.為進一步驗證5’側翼序列的啟動子活性,分彆截取5段不同長度的SPSⅢ基因5’側翼序列與報告基因GUS融閤,構建嵌閤基因錶達載體質粒,基因鎗微彈轟擊甘蔗愈傷組織觀測瞬時錶達,證實瞭所剋隆到的5’側翼序列具有啟動子活性,是甘蔗SPSⅢ基因的啟動子,且具有一定的錶達特性.本研究通過剋隆分析SPSⅢ基因以其啟動子,為研究基因結構和生物學功能提供瞭基礎資料.
감자시아국남방지구중요적당료작물.위체도증당적육충목표,대감자자당적루주요한속보취적연구시필불가소적.자당린산합성매(SPS)작위자당합성도경적관건한속매,대감자중자당합성화탄수화합물분배유착중요적영향.본연구채용장거리PCR법(LD-PCR)극륭도량조불동장도적감자(Saccharum spp.cv.FN95-1702)SPSⅢ기인조DNA편단.서렬분석표명,소득적편단기인결구상동,균함유13개외현자화12개내함자,기개방독마광(ORE)편마964개안기산,서렬제교GenBank,획득사순등륙호EU278617、EU278618.이차위기출,계속종감자기인조중확증출선전미지적SPSⅢ기인5’측익서렬,신청GenBank등륙호KC422670.전록인자결합위점생물신식학분석표명,해서렬함유순식DNA작용원건화계동자TATA계동합.위진일보험증5’측익서렬적계동자활성,분별절취5단불동장도적SPSⅢ기인5’측익서렬여보고기인GUS융합,구건감합기인표체재체질립,기인창미탄굉격감자유상조직관측순시표체,증실료소극륭도적5’측익서렬구유계동자활성,시감자SPSⅢ기인적계동자,차구유일정적표체특성.본연구통과극륭분석SPSⅢ기인이기계동자,위연구기인결구화생물학공능제공료기출자료.
