安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
20-23
,共4页
拟南芥%fibrillarin蛋白%ak6
擬南芥%fibrillarin蛋白%ak6
의남개%fibrillarin단백%ak6
Arabidopsis thaliana%Fibrillarin%ak6
[目的]研究拟南芥中Fibrillarin基因的克隆、表达及纯化,并探索其与ak6蛋白的相互作用.[方法]利用pGEX-6P-1与Fibrilla-rin基因构建重组表达质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,运用同样方法构建PET-28a-ak6原核表达质粒,获得His-ak6融合蛋白,并运用体外pull down技术验证二者的相互作用.[结果]在温度为37℃、诱导时间为16 ～20 h、IPTG浓度为0.5mmol/L时,fibrillarin蛋白的纯化浓度最高.试验成功获得了符合标准的RNA,并获得了与预期片段大小相符的清晰的目的条带;pull-down试验结果表明,拟南芥中fibrillarin蛋白与ak6蛋白具有相互作用.[结论]拟南芥ak6突变体植株可能由于ak6的缺失影响了rRNA前体的加工,从而抑制核糖体的合成,进而阻碍拟南芥茎的生长,使植株表现明显的矮小症状.
[目的]研究擬南芥中Fibrillarin基因的剋隆、錶達及純化,併探索其與ak6蛋白的相互作用.[方法]利用pGEX-6P-1與Fibrilla-rin基因構建重組錶達質粒,將重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導錶達,運用同樣方法構建PET-28a-ak6原覈錶達質粒,穫得His-ak6融閤蛋白,併運用體外pull down技術驗證二者的相互作用.[結果]在溫度為37℃、誘導時間為16 ～20 h、IPTG濃度為0.5mmol/L時,fibrillarin蛋白的純化濃度最高.試驗成功穫得瞭符閤標準的RNA,併穫得瞭與預期片段大小相符的清晰的目的條帶;pull-down試驗結果錶明,擬南芥中fibrillarin蛋白與ak6蛋白具有相互作用.[結論]擬南芥ak6突變體植株可能由于ak6的缺失影響瞭rRNA前體的加工,從而抑製覈糖體的閤成,進而阻礙擬南芥莖的生長,使植株錶現明顯的矮小癥狀.
[목적]연구의남개중Fibrillarin기인적극륭、표체급순화,병탐색기여ak6단백적상호작용.[방법]이용pGEX-6P-1여Fibrilla-rin기인구건중조표체질립,장중조질립전화도대장간균BL21(DE3)중진행유도표체,운용동양방법구건PET-28a-ak6원핵표체질립,획득His-ak6융합단백,병운용체외pull down기술험증이자적상호작용.[결과]재온도위37℃、유도시간위16 ～20 h、IPTG농도위0.5mmol/L시,fibrillarin단백적순화농도최고.시험성공획득료부합표준적RNA,병획득료여예기편단대소상부적청석적목적조대;pull-down시험결과표명,의남개중fibrillarin단백여ak6단백구유상호작용.[결론]의남개ak6돌변체식주가능유우ak6적결실영향료rRNA전체적가공,종이억제핵당체적합성,진이조애의남개경적생장,사식주표현명현적왜소증상.
