温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2013年
2期
78-83
,共6页
白细胞介素24%链亲和素%融合蛋白%原核表达
白細胞介素24%鏈親和素%融閤蛋白%原覈錶達
백세포개소24%련친화소%융합단백%원핵표체
目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素24融合蛋白(SA/hIL24),并鉴定其生物学活性.方法:通过RT-RCR扩增hIL-24基因序列,构建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和凝胶过滤层析纯化、透析复性.MTT法检测融合蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析融合蛋白对已生物素化的小鼠膀胱癌MB49细胞的锚定修饰效率.结果:成功构建两种融合蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达,表达量分别占菌体总蛋白的20％和35％,二次纯化后SA/hIL24融合蛋白纯度可达95％以上.SA/hIL24融合蛋白可高效结合至已生物素化的MB49肿瘤细胞表面(表面锚定修饰率大于90％),hIL24-SA融合蛋白可以剂量依赖的方式抑制Hela细胞的生长,而SA-hIL24融合蛋白对Hela细胞没有明显的抑制生长作用.结论:SA/hIL24融合蛋白的制备为hIL-24表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础.
目的:製備鏈親和素標記的人白細胞介素24融閤蛋白(SA/hIL24),併鑒定其生物學活性.方法:通過RT-RCR擴增hIL-24基因序列,構建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重組錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21 (DE3),IPTG誘導錶達,對錶達的融閤蛋白採用鎳金屬螯閤(Ni-NTA)層析和凝膠過濾層析純化、透析複性.MTT法檢測融閤蛋白對腫瘤細胞的生長抑製作用,流式細胞儀分析融閤蛋白對已生物素化的小鼠膀胱癌MB49細胞的錨定脩飾效率.結果:成功構建兩種融閤蛋白的重組錶達質粒,在大腸桿菌中實現高效錶達,錶達量分彆佔菌體總蛋白的20％和35％,二次純化後SA/hIL24融閤蛋白純度可達95％以上.SA/hIL24融閤蛋白可高效結閤至已生物素化的MB49腫瘤細胞錶麵(錶麵錨定脩飾率大于90％),hIL24-SA融閤蛋白可以劑量依賴的方式抑製Hela細胞的生長,而SA-hIL24融閤蛋白對Hela細胞沒有明顯的抑製生長作用.結論:SA/hIL24融閤蛋白的製備為hIL-24錶麵錨定脩飾的新型腫瘤細胞疫苗提供瞭基礎.
목적:제비련친화소표기적인백세포개소24융합단백(SA/hIL24),병감정기생물학활성.방법:통과RT-RCR확증hIL-24기인서렬,구건pET24a-SA-hIL24화pET21a-hIL24-SA중조표체질립,전화대장간균BL21 (DE3),IPTG유도표체,대표체적융합단백채용얼금속오합(Ni-NTA)층석화응효과려층석순화、투석복성.MTT법검측융합단백대종류세포적생장억제작용,류식세포의분석융합단백대이생물소화적소서방광암MB49세포적묘정수식효솔.결과:성공구건량충융합단백적중조표체질립,재대장간균중실현고효표체,표체량분별점균체총단백적20％화35％,이차순화후SA/hIL24융합단백순도가체95％이상.SA/hIL24융합단백가고효결합지이생물소화적MB49종류세포표면(표면묘정수식솔대우90％),hIL24-SA융합단백가이제량의뢰적방식억제Hela세포적생장,이SA-hIL24융합단백대Hela세포몰유명현적억제생장작용.결론:SA/hIL24융합단백적제비위hIL-24표면묘정수식적신형종류세포역묘제공료기출.
