温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2013年
2期
71-77
,共7页
潘嘉林%黄晓燕%邵驾宇%王本极%林素%王良国%戴晓春%杨德业
潘嘉林%黃曉燕%邵駕宇%王本極%林素%王良國%戴曉春%楊德業
반가림%황효연%소가우%왕본겁%림소%왕량국%대효춘%양덕업
miR-29b%自发性高血压大鼠%血管紧张素Ⅱ%肾小管上皮细胞%上皮细胞-间充质转分化
miR-29b%自髮性高血壓大鼠%血管緊張素Ⅱ%腎小管上皮細胞%上皮細胞-間充質轉分化
miR-29b%자발성고혈압대서%혈관긴장소Ⅱ%신소관상피세포%상피세포-간충질전분화
目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色.方法:实时定量PCR检测自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto (WKY)大鼠肾脏皮质组织miR-29b表达的差异.体外培养NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞,给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-7 mol/L(为AngⅡ组),以正常培养的细胞作空白对照,实时定量PCR检测AngⅡ组和正常对照组细胞miR-29b表达差异,运用WesternBolt技术和实时定量PCR技术分别检测AngⅡ组和空白对照组TGF-β、α肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达量.进一步分别再转染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低表达和高表达细胞模型.低表达模型实验分三组:①空白对照组:正常培养的肾小管上皮细胞未经任何处理；②低表达组:转染miR-29b inhibitor；③阴性对照组:转染随机合成NC microRNA片段.高表达模型实验分三组:①空白对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导；②高表达组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染miR-29b mimcs；③阴性对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染随机合成NC microRNA片段.用流式细胞仪技术检测转染率,用实时定量PCR检测转染效果,运用Western Bolt技术和实时定量PCR技术分别检测各组中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的表达量.结果:实时定量PCR检测SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P＜0.05),相比空白对照组(1.00±0.00),AngⅡ组miR-29b的表达(0.56±0.06)明显下降(P＜0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达明显升高(P＜0.05).流式细胞仪技术检测NRK-52E细胞转染率为95.14％,相比空白对照组(1.00±0.00),低表达组miR-29b表达(0.07±0.02)明显下降,高表达组miR-29b表达(38.3±8.1)明显升高(P＜0.05).在低表达模型实验中,低表达组α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均上调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).在高表达模型实验中,高表达组的NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β、Col I的mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均下调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论:SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达水平比WKY大鼠下降,这可能和SHR大鼠体内的高AngⅡ水平有关,miR-29b表达降低能促进肾小管上皮细胞发生EMT,AngⅡ调节肾小管上皮细胞发生EMT的一个潜在的机制可能是通过miR-29b来实现的.
目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管緊張素Ⅱ誘導腎小管上皮細胞間充質轉分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色.方法:實時定量PCR檢測自髮性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto (WKY)大鼠腎髒皮質組織miR-29b錶達的差異.體外培養NRK-52E大鼠腎小管上皮細胞,給予血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)10-7 mol/L(為AngⅡ組),以正常培養的細胞作空白對照,實時定量PCR檢測AngⅡ組和正常對照組細胞miR-29b錶達差異,運用WesternBolt技術和實時定量PCR技術分彆檢測AngⅡ組和空白對照組TGF-β、α肌動蛋白(α-SMA)和Ⅰ型膠原蛋白(Col Ⅰ)的錶達量.進一步分彆再轉染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低錶達和高錶達細胞模型.低錶達模型實驗分三組:①空白對照組:正常培養的腎小管上皮細胞未經任何處理；②低錶達組:轉染miR-29b inhibitor；③陰性對照組:轉染隨機閤成NC microRNA片段.高錶達模型實驗分三組:①空白對照組:腎小管上皮細胞給予AngⅡ(10-7 mol/L)誘導；②高錶達組:腎小管上皮細胞給予AngⅡ(10-7 mol/L)誘導,同時轉染miR-29b mimcs；③陰性對照組:腎小管上皮細胞給予AngⅡ(10-7 mol/L)誘導,同時轉染隨機閤成NC microRNA片段.用流式細胞儀技術檢測轉染率,用實時定量PCR檢測轉染效果,運用Western Bolt技術和實時定量PCR技術分彆檢測各組中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的錶達量.結果:實時定量PCR檢測SHR大鼠腎髒皮質組織miR-29b的錶達(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P＜0.05),相比空白對照組(1.00±0.00),AngⅡ組miR-29b的錶達(0.56±0.06)明顯下降(P＜0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA錶達和蛋白錶達明顯升高(P＜0.05).流式細胞儀技術檢測NRK-52E細胞轉染率為95.14％,相比空白對照組(1.00±0.00),低錶達組miR-29b錶達(0.07±0.02)明顯下降,高錶達組miR-29b錶達(38.3±8.1)明顯升高(P＜0.05).在低錶達模型實驗中,低錶達組α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA錶達和蛋白錶達比空白對照組和陰性對照組均上調(P＜0.05),而空白對照組和陰性對照組間差異無統計學意義(P＞0.05).在高錶達模型實驗中,高錶達組的NRK-52E細胞α-SMA、TGF-β、Col I的mRNA錶達和蛋白錶達比空白對照組和陰性對照組均下調(P＜0.05),而空白對照組和陰性對照組間差異無統計學意義(P＞ 0.05).結論:SHR大鼠腎髒皮質組織miR-29b的錶達水平比WKY大鼠下降,這可能和SHR大鼠體內的高AngⅡ水平有關,miR-29b錶達降低能促進腎小管上皮細胞髮生EMT,AngⅡ調節腎小管上皮細胞髮生EMT的一箇潛在的機製可能是通過miR-29b來實現的.
목적:연구microRNA-29b(miR-29b)재혈관긴장소Ⅱ유도신소관상피세포간충질전분화(epithelial-mesenchymal transition,EMT)중적각색.방법:실시정량PCR검측자발성고혈압대서(spontaneously hypertensive rats,SHR)화Wistar-Kyoto (WKY)대서신장피질조직miR-29b표체적차이.체외배양NRK-52E대서신소관상피세포,급여혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)10-7 mol/L(위AngⅡ조),이정상배양적세포작공백대조,실시정량PCR검측AngⅡ조화정상대조조세포miR-29b표체차이,운용WesternBolt기술화실시정량PCR기술분별검측AngⅡ조화공백대조조TGF-β、α기동단백(α-SMA)화Ⅰ형효원단백(Col Ⅰ)적표체량.진일보분별재전염miR-29b inhibitor화miR-29b mimics,건립miR-29b저표체화고표체세포모형.저표체모형실험분삼조:①공백대조조:정상배양적신소관상피세포미경임하처리；②저표체조:전염miR-29b inhibitor；③음성대조조:전염수궤합성NC microRNA편단.고표체모형실험분삼조:①공백대조조:신소관상피세포급여AngⅡ(10-7 mol/L)유도；②고표체조:신소관상피세포급여AngⅡ(10-7 mol/L)유도,동시전염miR-29b mimcs；③음성대조조:신소관상피세포급여AngⅡ(10-7 mol/L)유도,동시전염수궤합성NC microRNA편단.용류식세포의기술검측전염솔,용실시정량PCR검측전염효과,운용Western Bolt기술화실시정량PCR기술분별검측각조중TGF-β、α-SMA화Col Ⅰ적표체량.결과:실시정량PCR검측SHR대서신장피질조직miR-29b적표체(0.76±0.01)상비WKY대서(1.00±0.00)하강(P＜0.05),상비공백대조조(1.00±0.00),AngⅡ조miR-29b적표체(0.56±0.06)명현하강(P＜0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ적mRNA표체화단백표체명현승고(P＜0.05).류식세포의기술검측NRK-52E세포전염솔위95.14％,상비공백대조조(1.00±0.00),저표체조miR-29b표체(0.07±0.02)명현하강,고표체조miR-29b표체(38.3±8.1)명현승고(P＜0.05).재저표체모형실험중,저표체조α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA표체화단백표체비공백대조조화음성대조조균상조(P＜0.05),이공백대조조화음성대조조간차이무통계학의의(P＞0.05).재고표체모형실험중,고표체조적NRK-52E세포α-SMA、TGF-β、Col I적mRNA표체화단백표체비공백대조조화음성대조조균하조(P＜0.05),이공백대조조화음성대조조간차이무통계학의의(P＞ 0.05).결론:SHR대서신장피질조직miR-29b적표체수평비WKY대서하강,저가능화SHR대서체내적고AngⅡ수평유관,miR-29b표체강저능촉진신소관상피세포발생EMT,AngⅡ조절신소관상피세포발생EMT적일개잠재적궤제가능시통과miR-29b래실현적.
