南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
3期
351-355
,共5页
牛晓璐%许万福%李松玉%柯志勇%曾方银%罗深秋%邓凡
牛曉璐%許萬福%李鬆玉%柯誌勇%曾方銀%囉深鞦%鄧凡
우효로%허만복%리송옥%가지용%증방은%라심추%산범
蛋白激酶D1%烟曲霉分生孢子%NF-κB%转录激活%磷酸化
蛋白激酶D1%煙麯黴分生孢子%NF-κB%轉錄激活%燐痠化
단백격매D1%연곡매분생포자%NF-κB%전록격활%린산화
目的 研究蛋白激酶D1 (PKDl)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础.方法 首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105 CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-1uc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染人表达GFP、GFP-PKDl的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测.结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的磷酸化活性.过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性.结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用.
目的 研究蛋白激酶D1 (PKDl)在煙麯黴介導的NF-κB信號通路激活及轉錄活性中的作用,為進一步探討PKD1在煙麯黴感染引起的肺麯黴病中的作用及其機製奠定基礎.方法 首先將GFP、GFP-PKD1錶達質粒分彆轉染人肺腺癌細胞A549和HEK293細胞中,分彆將滅活的煙麯黴分生孢子(1×105 CFU/ml)于不同時間處理上述兩組細胞,Western blotting證實PKD1的過錶達,併檢測PKD1的燐痠化活性;其次在A549細胞中分彆轉染GFP-PKD1、siRNA-PKD1併以滅活的煙麯黴分生孢子處理細胞30 min,分彆檢測下遊NF-κB通路相關信號分子的燐痠化活性;最後,將NF-κB-1uc熒光素酶報告基因及內參照報告質粒海腎熒光素酶(pRL-SV40)共轉染人錶達GFP、GFP-PKDl的A549細胞中,兩組細胞在有無煙麯黴分生孢子的作用下處理24 h,收集細胞裂解液,進行雙色熒光素酶活性檢測.結果 Western blotting證實PKD1的過錶達時間依賴性地增彊煙麯黴刺激的A549細胞和HEK293細胞中PKD1的燐痠化活性及NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的燐痠化活性,反之,敲低PKD1的錶達則抑製煙麯黴介導的NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的燐痠化活性.過錶達PKD1明顯增加NF-κB-luc熒光素酶的轉錄激活活性.結論 PKD1可能在煙麯黴刺激的NF-κB通路的激活及轉錄活性中起重要作用.
목적 연구단백격매D1 (PKDl)재연곡매개도적NF-κB신호통로격활급전록활성중적작용,위진일보탐토PKD1재연곡매감염인기적폐곡매병중적작용급기궤제전정기출.방법 수선장GFP、GFP-PKD1표체질립분별전염인폐선암세포A549화HEK293세포중,분별장멸활적연곡매분생포자(1×105 CFU/ml)우불동시간처리상술량조세포,Western blotting증실PKD1적과표체,병검측PKD1적린산화활성;기차재A549세포중분별전염GFP-PKD1、siRNA-PKD1병이멸활적연곡매분생포자처리세포30 min,분별검측하유NF-κB통로상관신호분자적린산화활성;최후,장NF-κB-1uc형광소매보고기인급내삼조보고질립해신형광소매(pRL-SV40)공전염인표체GFP、GFP-PKDl적A549세포중,량조세포재유무연곡매분생포자적작용하처리24 h,수집세포렬해액,진행쌍색형광소매활성검측.결과 Western blotting증실PKD1적과표체시간의뢰성지증강연곡매자격적A549세포화HEK293세포중PKD1적린산화활성급NF-κB통로중IKB화p65(pS276)적린산화활성,반지,고저PKD1적표체칙억제연곡매개도적NF-κB통로중IKB화p65(pS276)적린산화활성.과표체PKD1명현증가NF-κB-luc형광소매적전록격활활성.결론 PKD1가능재연곡매자격적NF-κB통로적격활급전록활성중기중요작용.
