南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
3期
326-331
,共6页
林振%袁亮%孟越%冯瑞强%付兆宗%杨德鸿
林振%袁亮%孟越%馮瑞彊%付兆宗%楊德鴻
림진%원량%맹월%풍서강%부조종%양덕홍
PTH%成骨分化%基因突变%细胞核移位%CITED1
PTH%成骨分化%基因突變%細胞覈移位%CITED1
PTH%성골분화%기인돌변%세포핵이위%CITED1
目的 生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能.方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒分别转染MC3T3-E1细胞,培养2d,用100 nmol/LPTH (1-34)刺激细胞,行细胞免疫荧光实验,共聚焦镜下观察细胞内CITED1位置变化.将CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒按相应体系转染MC3T3-E1细胞,分为两组,一组成骨诱导4周,另一组成骨诱导基础上进行10 nmol/L PTH(1-34)间歇刺激(每48h刺激4 h)4周,测ALP酶活性及Ca离子浓度并进行ALP及茜素红染色.行RT-PCR实验分析成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC的表达量.结果 PTH(1-34)可促进CITED1进核,将CITED1氨基酸63-84片段突变后,可明显抑制该反应.4周成骨诱导后,CITED1过表达明显抑制成骨细胞分化,ALP及Ca离子浓度明显低于对照组,而CITED1突变质粒(9S>A)过表达ALP及Ca离子浓度明显高于CITED1组,与对照组基本相同.进一步研究表明,CITED1过表达抑制PTH(1-34)诱导的成骨细胞分化,而CITEDl突变质粒(9S>A)可逆转该反应.ALP染色及茜素红染色也验证了以上结论.RT-PCR结果提示:CITED1突变质粒(9S>A)过表达成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC明显高于CITED1质粒过表达.结论 CITED1 63-84片段丝氨酸为其重要的功能位点,可影响其细胞进核及成骨分化.
目的 生物信息學分析髮現CITED1 63-84氨基痠片段為其重要的功能片段,進一步研究CITED1 63-84氨基痠片段突變(絲氨痠突變為丙氨痠)是否影響其進覈及成骨分化,探討其在成骨分化過程中的生物學調控功能.方法 CITED1 63-84突變質粒(9S>A),CITED1質粒及空白質粒分彆轉染MC3T3-E1細胞,培養2d,用100 nmol/LPTH (1-34)刺激細胞,行細胞免疫熒光實驗,共聚焦鏡下觀察細胞內CITED1位置變化.將CITED1 63-84突變質粒(9S>A),CITED1質粒及空白質粒按相應體繫轉染MC3T3-E1細胞,分為兩組,一組成骨誘導4週,另一組成骨誘導基礎上進行10 nmol/L PTH(1-34)間歇刺激(每48h刺激4 h)4週,測ALP酶活性及Ca離子濃度併進行ALP及茜素紅染色.行RT-PCR實驗分析成骨相關基因ALP2,RUNX2,OC的錶達量.結果 PTH(1-34)可促進CITED1進覈,將CITED1氨基痠63-84片段突變後,可明顯抑製該反應.4週成骨誘導後,CITED1過錶達明顯抑製成骨細胞分化,ALP及Ca離子濃度明顯低于對照組,而CITED1突變質粒(9S>A)過錶達ALP及Ca離子濃度明顯高于CITED1組,與對照組基本相同.進一步研究錶明,CITED1過錶達抑製PTH(1-34)誘導的成骨細胞分化,而CITEDl突變質粒(9S>A)可逆轉該反應.ALP染色及茜素紅染色也驗證瞭以上結論.RT-PCR結果提示:CITED1突變質粒(9S>A)過錶達成骨相關基因ALP2,RUNX2,OC明顯高于CITED1質粒過錶達.結論 CITED1 63-84片段絲氨痠為其重要的功能位點,可影響其細胞進覈及成骨分化.
목적 생물신식학분석발현CITED1 63-84안기산편단위기중요적공능편단,진일보연구CITED1 63-84안기산편단돌변(사안산돌변위병안산)시부영향기진핵급성골분화,탐토기재성골분화과정중적생물학조공공능.방법 CITED1 63-84돌변질립(9S>A),CITED1질립급공백질립분별전염MC3T3-E1세포,배양2d,용100 nmol/LPTH (1-34)자격세포,행세포면역형광실험,공취초경하관찰세포내CITED1위치변화.장CITED1 63-84돌변질립(9S>A),CITED1질립급공백질립안상응체계전염MC3T3-E1세포,분위량조,일조성골유도4주,령일조성골유도기출상진행10 nmol/L PTH(1-34)간헐자격(매48h자격4 h)4주,측ALP매활성급Ca리자농도병진행ALP급천소홍염색.행RT-PCR실험분석성골상관기인ALP2,RUNX2,OC적표체량.결과 PTH(1-34)가촉진CITED1진핵,장CITED1안기산63-84편단돌변후,가명현억제해반응.4주성골유도후,CITED1과표체명현억제성골세포분화,ALP급Ca리자농도명현저우대조조,이CITED1돌변질립(9S>A)과표체ALP급Ca리자농도명현고우CITED1조,여대조조기본상동.진일보연구표명,CITED1과표체억제PTH(1-34)유도적성골세포분화,이CITEDl돌변질립(9S>A)가역전해반응.ALP염색급천소홍염색야험증료이상결론.RT-PCR결과제시:CITED1돌변질립(9S>A)과표체성골상관기인ALP2,RUNX2,OC명현고우CITED1질립과표체.결론 CITED1 63-84편단사안산위기중요적공능위점,가영향기세포진핵급성골분화.