CAJ | 학술논문

针对传统溶液酶解存在的酶解时间较长、酶自切物干扰以及蛋白酶不能重复使用等缺陷,通过电子转移生成催化剂的原子转移自由基聚合法修饰银丝,并以其为载体制备了一种新型的固定化酶反应器.用质谱考察了银丝固定化酶反应器(SW-Trypsin)的酶解效率、重复性和回收率.结果表明:绒毛状聚合物修饰的SW-Trypsin的酶解效率较高,酶解标准蛋白牛血清白蛋白(BSA)20 min后,肽段的氨基酸序列覆盖率可达93％,高于传统溶液酶解方法酶解16h所得79％的覆盖率.使用该固定化酶反应器于一个月内8次酶解BSA所得的氨基酸序列覆盖率在89％到97％之间,平均覆盖率为94％,显示出良好的稳定性.另外,该固定化酶反应器酶解马心肌红蛋白(MYO)的回收率为87.67％.最后,用SW-Trypsin酶解腾冲嗜热菌全蛋白20 min,所鉴定到的氨基酸序列覆盖率和蛋白数量与同样条件下溶液酶解16h的结果接近,且零漏切位点肽段的比例更高.加之容易分离的优点,SW-Trypsin在蛋白质组学的应用中具有良好的前景.
침대전통용액매해존재적매해시간교장、매자절물간우이급단백매불능중복사용등결함,통과전자전이생성최화제적원자전이자유기취합법수식은사,병이기위재체제비료일충신형적고정화매반응기.용질보고찰료은사고정화매반응기(SW-Trypsin)적매해효솔、중복성화회수솔.결과표명:융모상취합물수식적SW-Trypsin적매해효솔교고,매해표준단백우혈청백단백(BSA)20 min후,태단적안기산서렬복개솔가체93％,고우전통용액매해방법매해16h소득79％적복개솔.사용해고정화매반응기우일개월내8차매해BSA소득적안기산서렬복개솔재89％도97％지간,평균복개솔위94％,현시출량호적은정성.령외,해고정화매반응기매해마심기홍단백(MYO)적회수솔위87.67％.최후,용SW-Trypsin매해등충기열균전단백20 min,소감정도적안기산서렬복개솔화단백수량여동양조건하용액매해16h적결과접근,차령루절위점태단적비례경고.가지용역분리적우점,SW-Trypsin재단백질조학적응용중구유량호적전경.