CAJ | 학술논문

为了建立高灵敏度定量检测转基因棉花(Gossypium sp.)中新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)双抗体夹心酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),本研究以体外条件下制各NPTⅡ蛋白质为免疫原,制备兔(Lepus)抗NPTⅡ多克隆抗体为捕获抗体,小鼠(Mus musculus)抗NPTⅡ单克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法,以系列含量的NPTⅡ蛋白质作为标准品,建立标准曲线,对该方法各项指标进行验证,并对样品中所含NPTⅡ进行定量检测.结果表明,该双夹心ELISA对NPTⅡ检测范围为3.370～108.125 ng/mL,最低检测限为1.97 ng/mL;准确性实验回收率为96.11％～104.69％;精密性变异系数为6.58％～7.33％;与非转基因棉花内源蛋白质及其他种类转基因蛋白质无交叉反应;应用此方法对苗期转基因棉植株各部位NPTⅡ表达量进行检测,发现有明显差异.该方法特异性强,灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好,适用于检测转基因棉花中NPTⅡ含量,能够为今后转基因作物检测方法的建立及生物安全性评价等方面提供参考,具有良好应用价值和前景.
위료건립고령민도정량검측전기인면화(Gossypium sp.)중신매소린산전이매(NPTⅡ)쌍항체협심매련면역흡부방법(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),본연구이체외조건하제각NPTⅡ단백질위면역원,제비토(Lepus)항NPTⅡ다극륭항체위포획항체,소서(Mus musculus)항NPTⅡ단극륭항체위검측항체,건립료쌍항체협심ELISA방법,이계렬함량적NPTⅡ단백질작위표준품,건립표준곡선,대해방법각항지표진행험증,병대양품중소함NPTⅡ진행정량검측.결과표명,해쌍협심ELISA대NPTⅡ검측범위위3.370～108.125 ng/mL,최저검측한위1.97 ng/mL;준학성실험회수솔위96.11％～104.69％;정밀성변이계수위6.58％～7.33％;여비전기인면화내원단백질급기타충류전기인단백질무교차반응;응용차방법대묘기전기인면식주각부위NPTⅡ표체량진행검측,발현유명현차이.해방법특이성강,령민도고,준학성、중복성화은정성호,괄용우검측전기인면화중NPTⅡ함량,능구위금후전기인작물검측방법적건립급생물안전성평개등방면제공삼고,구유량호응용개치화전경.