CAJ | 학술논문

目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用.方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFv-ETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力.结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFv-ETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡.结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡.
목적:구건단련면역독소hscFv-ETA'적원핵표체재체,경표체후감정기대CML세포적특이성살상작용.방법:채용아극륭기술,수선장hscFv여절단적가단포균외독소기인ETA'통과매절급련접반응,재재체pWW20상구건hscFv-ETA'단련면역독소기인;재장기아극륭입pET32a(+)원핵표체재체중,전화BL21(DH3)숙주균,IPTG유도표체;SDS-PAGE관찰기표체수평병건립목적단백적순화방법,Western blot감정순화적목적단백,FCM감정융합단백hscFv-ETA'여세포결합적활성이급유도세포조망적능력.결과:한제성매절도보화서렬분석증실,재pET32a(+)원핵표체재체상성공지구건료hscFv-ETA'단련면역독소재체;해기인재pET32a(+)재체중획득고효표체,표체산물적상대분자질량여예기치상부;경Western blot감정증실순화후적중조면역독소hscFv-ETA'융합단백시정학적;경FCM증실hscFv-ETA'단백능특이성결합CML세포병유도세포조망.결론:이성공구건병원핵표체단련면역독소hscFv-ETA',증명해단백능발휘특이성결합병유도CML세포조망.