中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
2期
148-153
,共6页
丁朋举%惠明%姜广路%戴广明%赵立平%付育红%李卫民%黄海荣
丁朋舉%惠明%薑廣路%戴廣明%趙立平%付育紅%李衛民%黃海榮
정붕거%혜명%강엄로%대엄명%조립평%부육홍%리위민%황해영
脓肿分枝杆菌%硝基还原酶基因%克隆表达%分离纯化%生物信息学分析
膿腫分枝桿菌%硝基還原酶基因%剋隆錶達%分離純化%生物信息學分析
농종분지간균%초기환원매기인%극륭표체%분리순화%생물신식학분석
Mycobacterium abscessus%nitroreductase gene%cloning and expression%isolation and purification%bioinformatics analysis
目的 克隆表达脓肿分枝杆菌中的硝基还原酶(nitroreductase,Nrd)基因,并对其对应的蛋白质进行生物信息学分析.方法 利用PCR技术从脓肿分枝杆菌中扩增Nrd的全基因序列,采用原核表达系统进行体外表达.采用生物信息学方法对Nrd蛋白的理化性质、结构和功能等重要参数进行了预测和分析,对其三级结构进行了同源建模.结果 从脓肿分枝杆菌中扩增出660 bp的目的 片段,体外表达获得了大小约为30 kDa的带有His标签的重组蛋白.生物信息学分析显示Nrd蛋白有219个氨基酸组成,理论分子量和等电点分别为24.38 kDa和6.52,是一种不稳定的亲水性蛋白质(不稳定系数为54.52,总平均亲水性为-0.244);二级结构以α-螺旋、β-折叠和无规卷曲为主要构件;该蛋白的氨基酸序列与蛋白质结构数据库中3gr3蛋白A链的相似性最高为60%,以3gr3蛋白A链为模板构建了Nrd蛋白的三维结构分子模型.结论 成功表达并纯化了脓肿分枝杆菌中的Nrd蛋白.预测结果显示该蛋白是硝基还原酶家族成员之一,这提示Nrd蛋白在脓肿分枝杆菌中可能执行还原对硝基苯甲酸的功能.
目的 剋隆錶達膿腫分枝桿菌中的硝基還原酶(nitroreductase,Nrd)基因,併對其對應的蛋白質進行生物信息學分析.方法 利用PCR技術從膿腫分枝桿菌中擴增Nrd的全基因序列,採用原覈錶達繫統進行體外錶達.採用生物信息學方法對Nrd蛋白的理化性質、結構和功能等重要參數進行瞭預測和分析,對其三級結構進行瞭同源建模.結果 從膿腫分枝桿菌中擴增齣660 bp的目的 片段,體外錶達穫得瞭大小約為30 kDa的帶有His標籤的重組蛋白.生物信息學分析顯示Nrd蛋白有219箇氨基痠組成,理論分子量和等電點分彆為24.38 kDa和6.52,是一種不穩定的親水性蛋白質(不穩定繫數為54.52,總平均親水性為-0.244);二級結構以α-螺鏇、β-摺疊和無規捲麯為主要構件;該蛋白的氨基痠序列與蛋白質結構數據庫中3gr3蛋白A鏈的相似性最高為60%,以3gr3蛋白A鏈為模闆構建瞭Nrd蛋白的三維結構分子模型.結論 成功錶達併純化瞭膿腫分枝桿菌中的Nrd蛋白.預測結果顯示該蛋白是硝基還原酶傢族成員之一,這提示Nrd蛋白在膿腫分枝桿菌中可能執行還原對硝基苯甲痠的功能.
목적 극륭표체농종분지간균중적초기환원매(nitroreductase,Nrd)기인,병대기대응적단백질진행생물신식학분석.방법 이용PCR기술종농종분지간균중확증Nrd적전기인서렬,채용원핵표체계통진행체외표체.채용생물신식학방법대Nrd단백적이화성질、결구화공능등중요삼수진행료예측화분석,대기삼급결구진행료동원건모.결과 종농종분지간균중확증출660 bp적목적 편단,체외표체획득료대소약위30 kDa적대유His표첨적중조단백.생물신식학분석현시Nrd단백유219개안기산조성,이론분자량화등전점분별위24.38 kDa화6.52,시일충불은정적친수성단백질(불은정계수위54.52,총평균친수성위-0.244);이급결구이α-라선、β-절첩화무규권곡위주요구건;해단백적안기산서렬여단백질결구수거고중3gr3단백A련적상사성최고위60%,이3gr3단백A련위모판구건료Nrd단백적삼유결구분자모형.결론 성공표체병순화료농종분지간균중적Nrd단백.예측결과현시해단백시초기환원매가족성원지일,저제시Nrd단백재농종분지간균중가능집행환원대초기분갑산적공능.
