农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
389-396
,共8页
植物表达载体%构建%草莓%转基因
植物錶達載體%構建%草莓%轉基因
식물표체재체%구건%초매%전기인
Plant expression vector%Construction%Strawberry%Genetic transformation
为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和rnos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA 1301-ros做中间载体,并利用BamH Ⅰ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-del-ros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.),并进行PCR检测,获得转基因草莓.通过组织观察发现,转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色;实时RT-PCR分析表明,在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在转基因株系中的表达均上调,这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物.本研究结果表明,植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建,为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路,也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴.
為瞭研究多基因互作,減少多次轉化的不確定性,本研究在花青素閤成調節基因del(delila)和ros(rosea1)的上下遊分彆引入CaMV 35S啟動子和rnos終止子,以pBI121-del和pCAMBIA 1301-ros做中間載體,併利用BamH Ⅰ和BglⅡ產生相同4堿基末耑的片段,在連接酶的作用下將CaMV 35S啟動子分彆驅動的del和ros基因構建在同一箇植物錶達載體pCAMBIA2301上,利用所構建的載體pCAMBIA2301-del-ros通過根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404介導的方法轉化草莓(Fragaria ananassa Duch.),併進行PCR檢測,穫得轉基因草莓.通過組織觀察髮現,轉基因草莓的根和葉的顏色變成紅紫色;實時RT-PCR分析錶明,在轉基因草莓中花青素閤成的結構基因花色素閤成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查爾酮異構酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查爾酮閤酶(chalcone synthase,CHS)、二羥黃酮醇-4-還原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黃烷酮-3-羥化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H和類黃酮-3-O-葡糖基轉移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在轉基因株繫中的錶達均上調,這也進一步證實通過該方法構建的植物錶達載體pCAMBIA2301-del-ros可以用來轉化植物.本研究結果錶明,植物錶達載體pCAMBIA2301-del-ros成功構建,為多基因植物錶達載體的構建提供瞭一種思路,也為在植物體內同時研究多箇基因的互作提供藉鑒.
위료연구다기인호작,감소다차전화적불학정성,본연구재화청소합성조절기인del(delila)화ros(rosea1)적상하유분별인입CaMV 35S계동자화rnos종지자,이pBI121-del화pCAMBIA 1301-ros주중간재체,병이용BamH Ⅰ화BglⅡ산생상동4감기말단적편단,재련접매적작용하장CaMV 35S계동자분별구동적del화ros기인구건재동일개식물표체재체pCAMBIA2301상,이용소구건적재체pCAMBIA2301-del-ros통과근암농간균(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404개도적방법전화초매(Fragaria ananassa Duch.),병진행PCR검측,획득전기인초매.통과조직관찰발현,전기인초매적근화협적안색변성홍자색;실시RT-PCR분석표명,재전기인초매중화청소합성적결구기인화색소합성매(anthocyanidinsynthase,ANS)、사이동이구매(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、사이동합매(chalcone synthase,CHS)、이간황동순-4-환원매(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、황완동-3-간화매(flavanone 3-hydroxylase,F3H화류황동-3-O-포당기전이매(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)재전기인주계중적표체균상조,저야진일보증실통과해방법구건적식물표체재체pCAMBIA2301-del-ros가이용래전화식물.본연구결과표명,식물표체재체pCAMBIA2301-del-ros성공구건,위다기인식물표체재체적구건제공료일충사로,야위재식물체내동시연구다개기인적호작제공차감.
