CAJ | 학술논문

间充质干细胞(MSC)释放膜微囊(MV)是其促血管再生的重要机制.本研究旨在探索人骨髓MSC释放MV的适宜条件.收集5份健康人骨髓标本,分离培养并鉴定MSC.将第5代MSC分别悬浮于含10％胎牛血清或无血清的培养液中,按2×106/皿接种于直径为150 mm的培养皿中,在低氧(1％氧浓度)或常氧条件下培养72h,每组20皿.将培养上清高速离心收获MV.计数培养后贴壁细胞,并测定MV蛋白质含量.电子显微镜观察MV的形态以鉴定MV.流式细胞术分析MV的表面标志.在脐静脉内皮细胞培养体系中,加入不同来源的MV(10μg/ml),培养72 h后利用MTT实验观察细胞增殖活性.结果表明:多数MSC释放的MV直径＜100 nm,在电子显微镜下呈特征性的中空膜样结构.MV表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD31和CD45.在常氧含血清、常氧无血清、低氧含血清和低氧无血清条件下,台盼蓝抵抗的贴壁细胞扩增倍数分别为4.1、1.8、5.8和3.7,计算108细胞释放的MV蛋白含量分别为463.48±138.74、1604.07±445.28、2389.64±476.75和3141.18±353.01μg.MTT实验表明,低氧条件下获得的MV具有更好的促内皮细胞增殖作用.结论:低氧可促进MSC释放MV,低氧和无血清培养MSC可能是制备MSC-MV的适宜条件.
간충질간세포(MSC)석방막미낭(MV)시기촉혈관재생적중요궤제.본연구지재탐색인골수MSC석방MV적괄의조건.수집5빈건강인골수표본,분리배양병감정MSC.장제5대MSC분별현부우함10％태우혈청혹무혈청적배양액중,안2×106/명접충우직경위150 mm적배양명중,재저양(1％양농도)혹상양조건하배양72h,매조20명.장배양상청고속리심수획MV.계수배양후첩벽세포,병측정MV단백질함량.전자현미경관찰MV적형태이감정MV.류식세포술분석MV적표면표지.재제정맥내피세포배양체계중,가입불동래원적MV(10μg/ml),배양72 h후이용MTT실험관찰세포증식활성.결과표명:다수MSC석방적MV직경＜100 nm,재전자현미경하정특정성적중공막양결구.MV표체CD29、CD44、CD73화CD105,불표체CD31화CD45.재상양함혈청、상양무혈청、저양함혈청화저양무혈청조건하,태반람저항적첩벽세포확증배수분별위4.1、1.8、5.8화3.7,계산108세포석방적MV단백함량분별위463.48±138.74、1604.07±445.28、2389.64±476.75화3141.18±353.01μg.MTT실험표명,저양조건하획득적MV구유경호적촉내피세포증식작용.결론:저양가촉진MSC석방MV,저양화무혈청배양MSC가능시제비MSC-MV적괄의조건.