中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2014年
2期
412-420
,共9页
赵蕾%张鸿雁%庞雅坤%顾海慧%许静%袁卫平%程涛
趙蕾%張鴻雁%龐雅坤%顧海慧%許靜%袁衛平%程濤
조뢰%장홍안%방아곤%고해혜%허정%원위평%정도
Puma基因%造血干/祖细胞%脐血CD34+细胞%慢病毒载体
Puma基因%造血榦/祖細胞%臍血CD34+細胞%慢病毒載體
Puma기인%조혈간/조세포%제혈CD34+세포%만병독재체
Puma%hematopoietic stern/progenitor cell%cord blood CD34+ cell%lentivial vector
Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用.本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响.应用RT-PCR、Western Blot检测Puma基因在辐射刺激条件下的表达,采用慢病毒感染人脐血CD34+细胞分选GFP+细胞,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67染色检测细胞周期,CCK-8、Brdu标记法检测细胞增殖能力,并进行集落形成实验(colony formig cell assay,CFC).结果表明:Puma基因表达量随着射线强度的增加而增高,Puma基因表达下调抑制造血祖细胞体外集落形成能力和体外增殖能力.在辐射刺激条件下,抑制Puma基因表达可以减少人脐血CD34+细胞凋亡,维持细胞周期于G0期.结论:人脐血CD34+造血干细胞中Puma基因敲降具有一定的抗辐射作用,维持细胞于静息状态.
Puma屬于BCL-2傢族中BH3-only亞傢族,動物和細胞研究髮現其通過p53依賴和非依賴途徑誘導細胞凋亡,併具有抗放射保護不增加腫瘤髮生率的作用.本研究檢測Puma基因敲降後對人臍血CD34+造血榦祖細胞生物學功能的影響.應用RT-PCR、Western Blot檢測Puma基因在輻射刺激條件下的錶達,採用慢病毒感染人臍血CD34+細胞分選GFP+細胞,Annexin V-PE/7-AAD雙染流式細胞術檢測細胞凋亡,Ki67染色檢測細胞週期,CCK-8、Brdu標記法檢測細胞增殖能力,併進行集落形成實驗(colony formig cell assay,CFC).結果錶明:Puma基因錶達量隨著射線彊度的增加而增高,Puma基因錶達下調抑製造血祖細胞體外集落形成能力和體外增殖能力.在輻射刺激條件下,抑製Puma基因錶達可以減少人臍血CD34+細胞凋亡,維持細胞週期于G0期.結論:人臍血CD34+造血榦細胞中Puma基因敲降具有一定的抗輻射作用,維持細胞于靜息狀態.
Puma속우BCL-2가족중BH3-only아가족,동물화세포연구발현기통과p53의뢰화비의뢰도경유도세포조망,병구유항방사보호불증가종류발생솔적작용.본연구검측Puma기인고강후대인제혈CD34+조혈간조세포생물학공능적영향.응용RT-PCR、Western Blot검측Puma기인재복사자격조건하적표체,채용만병독감염인제혈CD34+세포분선GFP+세포,Annexin V-PE/7-AAD쌍염류식세포술검측세포조망,Ki67염색검측세포주기,CCK-8、Brdu표기법검측세포증식능력,병진행집락형성실험(colony formig cell assay,CFC).결과표명:Puma기인표체량수착사선강도적증가이증고,Puma기인표체하조억제조혈조세포체외집락형성능력화체외증식능력.재복사자격조건하,억제Puma기인표체가이감소인제혈CD34+세포조망,유지세포주기우G0기.결론:인제혈CD34+조혈간세포중Puma기인고강구유일정적항복사작용,유지세포우정식상태.
