中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2013年
11期
1135-1141
,共7页
马佳佳%Nick Lu%陈必良
馬佳佳%Nick Lu%陳必良
마가가%Nick Lu%진필량
哮喘%妊娠%免疫球蛋白G%树突状细胞%T细胞%免疫耐受
哮喘%妊娠%免疫毬蛋白G%樹突狀細胞%T細胞%免疫耐受
효천%임신%면역구단백G%수돌상세포%T세포%면역내수
目的:构建编码人全长IL-17R与FcγRⅡb双基因表达重组腺病毒载体并对其特性进行鉴定,探讨阻断其信号调节通路对妊娠哮喘发病的影响.方法:将扩增出的拼接基因片段定向克隆于pAdTrack-CMV中经与pAdeasy-1同源重组,鉴定正确的阳性重组子通过脂质体介导转入AD293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光(GFP)信号并采用PCR法对其进行鉴定;纯化腺病毒感染体外细胞因子协同诱导培养的妊娠哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC),利用RT-PCR、Western免疫印迹检测IL-17R和FcγRⅡb表达;流式细胞术、CCK-8、ELISA分析重组腺病毒的修饰对DC表面分子表达,刺激T细胞增殖抑制变化和MLR上清中IFN-γ、IL-4、IL-17分泌水平影响.结果:构建的重组腺病毒载体插入序列完全正确;经GFP表达和PCR检测证实成功包装获得高滴度重组腺病毒;感染DCs的GFP阳性细胞数达到85%;在 mRNA 及蛋白水平均可同时转录和表达出符合预期的IL-17R和FcγRⅡb.CD11c阳性表达率在各组间无显著差异;与对照细胞及EGFP-DCs相比,经IL-17R-FcγRⅡb修饰的DC表面CD80表达增高,而CD86表达减少(P＜0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs相同浓度比例刺激T细胞增殖水平均明显受抑(P＜0.05);转染载体共培养物上清液中Th2/Th17类细胞因子IL-4、IL-17水平下降,Th1类细胞因子IFN-γ升高(P＜0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17相对比值增加(P＜0.05).结论:IL-17R-FcγRⅡb融合基因体外阻断CD86/CD28共刺激通路可诱导DC免疫耐受状态,抑制抗原特异性T细胞增殖并影响Th1/Th2/Th17亚群分化,有望在妊娠哮喘免疫耐受缺陷和缓解气道炎症反应中发挥作用.
目的:構建編碼人全長IL-17R與FcγRⅡb雙基因錶達重組腺病毒載體併對其特性進行鑒定,探討阻斷其信號調節通路對妊娠哮喘髮病的影響.方法:將擴增齣的拼接基因片段定嚮剋隆于pAdTrack-CMV中經與pAdeasy-1同源重組,鑒定正確的暘性重組子通過脂質體介導轉入AD293細胞,熒光顯微鏡觀察綠色熒光(GFP)信號併採用PCR法對其進行鑒定;純化腺病毒感染體外細胞因子協同誘導培養的妊娠哮喘模型小鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC),利用RT-PCR、Western免疫印跡檢測IL-17R和FcγRⅡb錶達;流式細胞術、CCK-8、ELISA分析重組腺病毒的脩飾對DC錶麵分子錶達,刺激T細胞增殖抑製變化和MLR上清中IFN-γ、IL-4、IL-17分泌水平影響.結果:構建的重組腺病毒載體插入序列完全正確;經GFP錶達和PCR檢測證實成功包裝穫得高滴度重組腺病毒;感染DCs的GFP暘性細胞數達到85%;在 mRNA 及蛋白水平均可同時轉錄和錶達齣符閤預期的IL-17R和FcγRⅡb.CD11c暘性錶達率在各組間無顯著差異;與對照細胞及EGFP-DCs相比,經IL-17R-FcγRⅡb脩飾的DC錶麵CD80錶達增高,而CD86錶達減少(P＜0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs相同濃度比例刺激T細胞增殖水平均明顯受抑(P＜0.05);轉染載體共培養物上清液中Th2/Th17類細胞因子IL-4、IL-17水平下降,Th1類細胞因子IFN-γ升高(P＜0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17相對比值增加(P＜0.05).結論:IL-17R-FcγRⅡb融閤基因體外阻斷CD86/CD28共刺激通路可誘導DC免疫耐受狀態,抑製抗原特異性T細胞增殖併影響Th1/Th2/Th17亞群分化,有望在妊娠哮喘免疫耐受缺陷和緩解氣道炎癥反應中髮揮作用.
목적:구건편마인전장IL-17R여FcγRⅡb쌍기인표체중조선병독재체병대기특성진행감정,탐토조단기신호조절통로대임신효천발병적영향.방법:장확증출적병접기인편단정향극륭우pAdTrack-CMV중경여pAdeasy-1동원중조,감정정학적양성중조자통과지질체개도전입AD293세포,형광현미경관찰록색형광(GFP)신호병채용PCR법대기진행감정;순화선병독감염체외세포인자협동유도배양적임신효천모형소서골수래원수돌상세포(DC),이용RT-PCR、Western면역인적검측IL-17R화FcγRⅡb표체;류식세포술、CCK-8、ELISA분석중조선병독적수식대DC표면분자표체,자격T세포증식억제변화화MLR상청중IFN-γ、IL-4、IL-17분비수평영향.결과:구건적중조선병독재체삽입서렬완전정학;경GFP표체화PCR검측증실성공포장획득고적도중조선병독;감염DCs적GFP양성세포수체도85%;재 mRNA 급단백수평균가동시전록화표체출부합예기적IL-17R화FcγRⅡb.CD11c양성표체솔재각조간무현저차이;여대조세포급EGFP-DCs상비,경IL-17R-FcγRⅡb수식적DC표면CD80표체증고,이CD86표체감소(P＜0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs상동농도비례자격T세포증식수평균명현수억(P＜0.05);전염재체공배양물상청액중Th2/Th17류세포인자IL-4、IL-17수평하강,Th1류세포인자IFN-γ승고(P＜0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17상대비치증가(P＜0.05).결론:IL-17R-FcγRⅡb융합기인체외조단CD86/CD28공자격통로가유도DC면역내수상태,억제항원특이성T세포증식병영향Th1/Th2/Th17아군분화,유망재임신효천면역내수결함화완해기도염증반응중발휘작용.
