重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物在毕赤酵母中的表达
중조인조직형섬용매원격활제연생물재필적효모중적표체
The expression of a recombtnant protein of Tissue plasminogen Activator in P. Pastoris
  • 万方数据
    安徽医学 안휘의학
    ANHUI MEDICAL JOURNAL
    2007年 2期 91-94 ,共4页

    章晟%陈薇%于长明%传玲%杨秀旭%徐俊杰%刘树玲%朱曼%翁少洁%于婷

    장성%진미%우장명%전령%양수욱%서준걸%류수령%주만%옹소길%우정

    毕赤酵母%重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物 畢赤酵母%重組人組織型纖溶酶原激活劑衍生物
    필적효모%중조인조직형섬용매원격활제연생물
    目的 在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性.方法 用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的 蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,转化到宿主菌GS115,菌落PCR鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定表达产物,再通过层析法纯化目的 蛋白,用溶圈法测定目的 蛋白的活性.结果 表达的重组蛋白分子量约为50 kD.纯化后的目的 蛋白的纯度可达到95%.Western-blot显示能与抗tPA抗体特异性结合,纯化后rPAm比活性为5.02×105 IU/mg,比活性与t-PA相当.结论 成功构建了rPAm酵母表达工程菌,建立了对目的 蛋白的纯化方法.
    목적 재필적효모중표체중조인조직형섬용매원격활제연생물(rPAm),병검측rPAm적활성.방법 용PCR종질립pLFrGGI상확증출목적 단백(rPAm)기인,재아극륭도효모표체재체pMEX9K중,전화도숙주균GS115,균락PCR감정전화자,중조효모경갑순유도후,통과SDS-PAGE급Western-blot분석감정표체산물,재통과층석법순화목적 단백,용용권법측정목적 단백적활성.결과 표체적중조단백분자량약위50 kD.순화후적목적 단백적순도가체도95%.Western-blot현시능여항tPA항체특이성결합,순화후rPAm비활성위5.02×105 IU/mg,비활성여t-PA상당.결론 성공구건료rPAm효모표체공정균,건립료대목적 단백적순화방법.
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