热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2012年
12期
2252-2256
,共5页
张雨良%黄启星%张树珍%王健华%余乃通%刘志昕
張雨良%黃啟星%張樹珍%王健華%餘迺通%劉誌昕
장우량%황계성%장수진%왕건화%여내통%류지흔
高粱花叶病毒%Hcpro%CP%PIPO%酵母双杂交%诱饵载体
高粱花葉病毒%Hcpro%CP%PIPO%酵母雙雜交%誘餌載體
고량화협병독%Hcpro%CP%PIPO%효모쌍잡교%유이재체
采用同源克隆技术获得侵染甘蔗高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的Hcpro、CP、PIPO基因片段.将该基因片段连接至pGBKT7载体,分别构建酵母双杂交诱饵载体pGBKTT-Hcpro、pGBKT7-CP和pGBKTT-PIPO,经PCR、酶切及测序鉴定,证明重组诱饵载体构建成功后,将重组质粒导入Y2H Gold酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用.结果表明,含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性.含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/-His营养缺陷平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对ADE2、HIS3报告基因无自激活作用.研究结果为下一步利用酵母双杂交系统检测与高粱花叶病毒Hcpro、CP、PIPO蛋白相互作用的甘蔗蛋白提供基础.
採用同源剋隆技術穫得侵染甘蔗高粱花葉病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的Hcpro、CP、PIPO基因片段.將該基因片段連接至pGBKT7載體,分彆構建酵母雙雜交誘餌載體pGBKTT-Hcpro、pGBKT7-CP和pGBKTT-PIPO,經PCR、酶切及測序鑒定,證明重組誘餌載體構建成功後,將重組質粒導入Y2H Gold酵母菌株,檢測其錶達產物對酵母細胞有無毒性及對報告基因有無激活作用.結果錶明,含重組誘餌質粒的酵母菌株在SD/-Trp營養缺陷平闆上生長良好,錶明重組誘餌質粒錶達產物對酵母細胞無毒性.含重組誘餌質粒的酵母菌株在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/-His營養缺陷平闆上不能生長,錶明重組誘餌質粒錶達產物對ADE2、HIS3報告基因無自激活作用.研究結果為下一步利用酵母雙雜交繫統檢測與高粱花葉病毒Hcpro、CP、PIPO蛋白相互作用的甘蔗蛋白提供基礎.
채용동원극륭기술획득침염감자고량화협병독(Sorghum mosaic virus,SrMV)적Hcpro、CP、PIPO기인편단.장해기인편단련접지pGBKT7재체,분별구건효모쌍잡교유이재체pGBKTT-Hcpro、pGBKT7-CP화pGBKTT-PIPO,경PCR、매절급측서감정,증명중조유이재체구건성공후,장중조질립도입Y2H Gold효모균주,검측기표체산물대효모세포유무독성급대보고기인유무격활작용.결과표명,함중조유이질립적효모균주재SD/-Trp영양결함평판상생장량호,표명중조유이질립표체산물대효모세포무독성.함중조유이질립적효모균주재SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade화SD/-Trp/-His영양결함평판상불능생장,표명중조유이질립표체산물대ADE2、HIS3보고기인무자격활작용.연구결과위하일보이용효모쌍잡교계통검측여고량화협병독Hcpro、CP、PIPO단백상호작용적감자단백제공기출.
