热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2012年
12期
2246-2251
,共6页
谭老喜%王洪星%张雨良%王健华%章绍延%周朋%余乃通%刘志昕
譚老喜%王洪星%張雨良%王健華%章紹延%週朋%餘迺通%劉誌昕
담로희%왕홍성%장우량%왕건화%장소연%주붕%여내통%류지흔
香蕉束顶病毒Haikou2分离物%BBTVDNA2%原核表达%抗血清制备
香蕉束頂病毒Haikou2分離物%BBTVDNA2%原覈錶達%抗血清製備
향초속정병독Haikou2분리물%BBTVDNA2%원핵표체%항혈청제비
香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产.BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究.本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备.结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3h.融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清.Western blot实验表明抗血清具有特异性; 酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954 μg/mL浓度的表达纯化蛋白.
香蕉束頂病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,嚴重威脅著香蕉的生產.BBTV基因組至少由6箇環狀ssDNA組分組成,其中DNA2組分變異最大,是否編碼蛋白及其功能缺乏研究.本研究通過PCR方法剋隆瞭BBTV Haikou2 DNA2ORF,將其構建到pET32a載體中,進行原覈錶達和抗血清製備.結果錶明重組錶達載體pET32a-DNA2ORF在錶達菌Transetta(DE3)中錶達一箇約21 ku的特異融閤蛋白,通過超聲波破碎儀破碎細胞和誘導條件優化,分析錶明,該蛋白主要以可溶形式存在,最佳錶達條件為30℃、1.0 mmol/L IPTG誘導3h.融閤蛋白經過Ni2+-NTA瓊脂糖親和層析純化,免疫傢兔製備齣抗血清.Western blot實驗錶明抗血清具有特異性; 酶聯法(ID-ELISA)測定錶明,抗血清效價達到25 000,能夠檢測齣香蕉汁液中加入的0.954 μg/mL濃度的錶達純化蛋白.
향초속정병독(Banana bunchy top virus,BBTV)시위해향초적주요병독지일,엄중위협착향초적생산.BBTV기인조지소유6개배상ssDNA조분조성,기중DNA2조분변이최대,시부편마단백급기공능결핍연구.본연구통과PCR방법극륭료BBTV Haikou2 DNA2ORF,장기구건도pET32a재체중,진행원핵표체화항혈청제비.결과표명중조표체재체pET32a-DNA2ORF재표체균Transetta(DE3)중표체일개약21 ku적특이융합단백,통과초성파파쇄의파쇄세포화유도조건우화,분석표명,해단백주요이가용형식존재,최가표체조건위30℃、1.0 mmol/L IPTG유도3h.융합단백경과Ni2+-NTA경지당친화층석순화,면역가토제비출항혈청.Western blot실험표명항혈청구유특이성; 매련법(ID-ELISA)측정표명,항혈청효개체도25 000,능구검측출향초즙액중가입적0.954 μg/mL농도적표체순화단백.
