中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2012年
12期
1221-1227
,共7页
唐娟%曹兰琴%易红%汤参娥
唐娟%曹蘭琴%易紅%湯參娥
당연%조란금%역홍%탕삼아
RNA干扰%卵巢癌%prohibitin%紫杉醇耐药
RNA榦擾%卵巢癌%prohibitin%紫杉醇耐藥
RNA간우%란소암%prohibitin%자삼순내약
目的:研究转染pshRNA/prohibitin (PHB)的RNA干扰对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的生物学特性的影响.方法:采用Western印迹及实时PCR方法验证卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(SKOV3/Taxol-25)和敏感细胞株(SKOV3)中PHB蛋白与mRNA的表达差异.以脂质体Lipofectamine2000为载体,将针对PHB基因设计的带有荧光蛋白的三靶特异性小发夹RNA干扰片段,即pshRNA/PHB427 (PHB1实验组)、pshRNA/PHB248 (PHB2实验组)、pshRNA/PHB136 (PHB3实验组)瞬时转染耐药细胞株,另设阴性对照组.转染48 h后,用Western印迹及实时PCR方法检测PHB蛋白与mRNA的表达情况,筛选出沉默效果明显的两个片段(PHB1及PHB3)为实验组,与阴性对照组进行后续实验.用MTT及流式细胞术检测实验组及对照组的细胞增殖、紫杉醇IC50及凋亡情况.结果:耐药细胞株中PHB蛋白相对表达量及mRNA相对表达量(2-ΔΔct)明显高于敏感细胞株(P＜0.05).PHB1和PHB3实验组的蛋白相对表达量及mRNA相对表达量(2-ΔΔct)较阴性对照组明显降低(P＜0.05).转染48 h及72 h后PHB1及PHB3实验组细胞的增殖较阴性对照组明显减慢(P＜0.05)；干扰后72 h各实验组紫杉醇IC50较干扰前明显下降(p＜0.05)；转染48 h后PHB1及PHB3实验组细胞凋亡率较阴性对照组明显增加(P＜0.05).结论:针对PHB合成的shRNA能有效抑制耐药细胞株中PHB基因表达,沉默PHB基因后耐药细胞株的细胞增殖能力下降,凋亡率增加,对紫杉醇敏感性增加,提示PHB与卵巢癌紫杉醇耐药相关,干扰PHB基因的表达可能降低卵巢癌紫杉醇耐药性.
目的:研究轉染pshRNA/prohibitin (PHB)的RNA榦擾對卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株的生物學特性的影響.方法:採用Western印跡及實時PCR方法驗證卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株(SKOV3/Taxol-25)和敏感細胞株(SKOV3)中PHB蛋白與mRNA的錶達差異.以脂質體Lipofectamine2000為載體,將針對PHB基因設計的帶有熒光蛋白的三靶特異性小髮夾RNA榦擾片段,即pshRNA/PHB427 (PHB1實驗組)、pshRNA/PHB248 (PHB2實驗組)、pshRNA/PHB136 (PHB3實驗組)瞬時轉染耐藥細胞株,另設陰性對照組.轉染48 h後,用Western印跡及實時PCR方法檢測PHB蛋白與mRNA的錶達情況,篩選齣沉默效果明顯的兩箇片段(PHB1及PHB3)為實驗組,與陰性對照組進行後續實驗.用MTT及流式細胞術檢測實驗組及對照組的細胞增殖、紫杉醇IC50及凋亡情況.結果:耐藥細胞株中PHB蛋白相對錶達量及mRNA相對錶達量(2-ΔΔct)明顯高于敏感細胞株(P＜0.05).PHB1和PHB3實驗組的蛋白相對錶達量及mRNA相對錶達量(2-ΔΔct)較陰性對照組明顯降低(P＜0.05).轉染48 h及72 h後PHB1及PHB3實驗組細胞的增殖較陰性對照組明顯減慢(P＜0.05)；榦擾後72 h各實驗組紫杉醇IC50較榦擾前明顯下降(p＜0.05)；轉染48 h後PHB1及PHB3實驗組細胞凋亡率較陰性對照組明顯增加(P＜0.05).結論:針對PHB閤成的shRNA能有效抑製耐藥細胞株中PHB基因錶達,沉默PHB基因後耐藥細胞株的細胞增殖能力下降,凋亡率增加,對紫杉醇敏感性增加,提示PHB與卵巢癌紫杉醇耐藥相關,榦擾PHB基因的錶達可能降低卵巢癌紫杉醇耐藥性.
목적:연구전염pshRNA/prohibitin (PHB)적RNA간우대란소암자삼순내약세포주적생물학특성적영향.방법:채용Western인적급실시PCR방법험증란소암자삼순내약세포주(SKOV3/Taxol-25)화민감세포주(SKOV3)중PHB단백여mRNA적표체차이.이지질체Lipofectamine2000위재체,장침대PHB기인설계적대유형광단백적삼파특이성소발협RNA간우편단,즉pshRNA/PHB427 (PHB1실험조)、pshRNA/PHB248 (PHB2실험조)、pshRNA/PHB136 (PHB3실험조)순시전염내약세포주,령설음성대조조.전염48 h후,용Western인적급실시PCR방법검측PHB단백여mRNA적표체정황,사선출침묵효과명현적량개편단(PHB1급PHB3)위실험조,여음성대조조진행후속실험.용MTT급류식세포술검측실험조급대조조적세포증식、자삼순IC50급조망정황.결과:내약세포주중PHB단백상대표체량급mRNA상대표체량(2-ΔΔct)명현고우민감세포주(P＜0.05).PHB1화PHB3실험조적단백상대표체량급mRNA상대표체량(2-ΔΔct)교음성대조조명현강저(P＜0.05).전염48 h급72 h후PHB1급PHB3실험조세포적증식교음성대조조명현감만(P＜0.05)；간우후72 h각실험조자삼순IC50교간우전명현하강(p＜0.05)；전염48 h후PHB1급PHB3실험조세포조망솔교음성대조조명현증가(P＜0.05).결론:침대PHB합성적shRNA능유효억제내약세포주중PHB기인표체,침묵PHB기인후내약세포주적세포증식능력하강,조망솔증가,대자삼순민감성증가,제시PHB여란소암자삼순내약상관,간우PHB기인적표체가능강저란소암자삼순내약성.
