郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
6期
756-758
,共3页
高媛%刘振华%冯菁华%李晓云%孙其喆%张宝%郑文岭%马文丽
高媛%劉振華%馮菁華%李曉雲%孫其喆%張寶%鄭文嶺%馬文麗
고원%류진화%풍정화%리효운%손기철%장보%정문령%마문려
pp%GalNacT-10%真核表达载体%293T细胞
pp%GalNacT-10%真覈錶達載體%293T細胞
pp%GalNacT-10%진핵표체재체%293T세포
目的:构建pp GalNacT-10基因真核表达载体.方法:采用PCR方法合成含有酶切位点(XbaⅠ、EcoRⅠ)的pp GalNacT-10 cDNA.构建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisense,鉴定及测序证实cDNA片段大小和序列.双酶切目的载体pcDNA3.1后,与GalNacT-10-ORF和GalNacT-10-antisense片段进行连接,构建正义和反义真核表达载体pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,将其分别转染293T细胞,Western blot法检测pp GalNacT-10蛋白的表达.结果:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense包含大小、序列正确的pp GalNacT-10片段;pp GalNacT-10蛋白在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF的293T细胞中高表达,在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense的293T细胞中表达降低.结论:成功构建了pp GalNacT-10基因正义和反义真核表达载体.
目的:構建pp GalNacT-10基因真覈錶達載體.方法:採用PCR方法閤成含有酶切位點(XbaⅠ、EcoRⅠ)的pp GalNacT-10 cDNA.構建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisense,鑒定及測序證實cDNA片段大小和序列.雙酶切目的載體pcDNA3.1後,與GalNacT-10-ORF和GalNacT-10-antisense片段進行連接,構建正義和反義真覈錶達載體pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,將其分彆轉染293T細胞,Western blot法檢測pp GalNacT-10蛋白的錶達.結果:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense包含大小、序列正確的pp GalNacT-10片段;pp GalNacT-10蛋白在轉染pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF的293T細胞中高錶達,在轉染pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense的293T細胞中錶達降低.結論:成功構建瞭pp GalNacT-10基因正義和反義真覈錶達載體.
목적:구건pp GalNacT-10기인진핵표체재체.방법:채용PCR방법합성함유매절위점(XbaⅠ、EcoRⅠ)적pp GalNacT-10 cDNA.구건pMD19T-GalNacT-10-ORF화pMD19T-GalNacT-10-antisense,감정급측서증실cDNA편단대소화서렬.쌍매절목적재체pcDNA3.1후,여GalNacT-10-ORF화GalNacT-10-antisense편단진행련접,구건정의화반의진핵표체재체pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF화pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,장기분별전염293T세포,Western blot법검측pp GalNacT-10단백적표체.결과:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF화pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense포함대소、서렬정학적pp GalNacT-10편단;pp GalNacT-10단백재전염pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF적293T세포중고표체,재전염pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense적293T세포중표체강저.결론:성공구건료pp GalNacT-10기인정의화반의진핵표체재체.
