宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2012年
12期
1249-1252,1256
,共5页
郭东更%高岭%杨青兰%田文真%李红梅
郭東更%高嶺%楊青蘭%田文真%李紅梅
곽동경%고령%양청란%전문진%리홍매
PPARα%miRNA%生物信息学%荧光素酶活性
PPARα%miRNA%生物信息學%熒光素酶活性
PPARα%miRNA%생물신식학%형광소매활성
目的 预测并鉴定PPARα靶向的人miRNA.方法 通过生物信息学分析预测PPARα靶向的miRNA.PCR扩增PPARα的3＇UTR,克隆至报告基因载体中,与候选miRNA共转染293T细胞,双荧光素酶活性分析确定候选miRNA与PPARα的结合位点.在293T细胞中瞬时转染候选miRNA类似体,提取总RNA及全蛋白,应用real time PCR和Western blot检测PPARα mRNA和蛋白的表达.结果 (1)TargetScan数据库预测到miR-9和miR-124能与PPARα的3＇UTR区互补结合.(2)miR-9或miR-124均可降低pmirGLO-PPARα-3＇UTR荧光素酶活性(P＜0.01).(3)在miR-9或miR-124过表达的293T细胞中,PPARα mRNA和蛋白表达均降低(P＜0.01).结论 PPARα是miR-9和miR-124共同的靶基因,miR-9或miR-124在转录水平负性调控PPARα的表达.
目的 預測併鑒定PPARα靶嚮的人miRNA.方法 通過生物信息學分析預測PPARα靶嚮的miRNA.PCR擴增PPARα的3＇UTR,剋隆至報告基因載體中,與候選miRNA共轉染293T細胞,雙熒光素酶活性分析確定候選miRNA與PPARα的結閤位點.在293T細胞中瞬時轉染候選miRNA類似體,提取總RNA及全蛋白,應用real time PCR和Western blot檢測PPARα mRNA和蛋白的錶達.結果 (1)TargetScan數據庫預測到miR-9和miR-124能與PPARα的3＇UTR區互補結閤.(2)miR-9或miR-124均可降低pmirGLO-PPARα-3＇UTR熒光素酶活性(P＜0.01).(3)在miR-9或miR-124過錶達的293T細胞中,PPARα mRNA和蛋白錶達均降低(P＜0.01).結論 PPARα是miR-9和miR-124共同的靶基因,miR-9或miR-124在轉錄水平負性調控PPARα的錶達.
목적 예측병감정PPARα파향적인miRNA.방법 통과생물신식학분석예측PPARα파향적miRNA.PCR확증PPARα적3＇UTR,극륭지보고기인재체중,여후선miRNA공전염293T세포,쌍형광소매활성분석학정후선miRNA여PPARα적결합위점.재293T세포중순시전염후선miRNA유사체,제취총RNA급전단백,응용real time PCR화Western blot검측PPARα mRNA화단백적표체.결과 (1)TargetScan수거고예측도miR-9화miR-124능여PPARα적3＇UTR구호보결합.(2)miR-9혹miR-124균가강저pmirGLO-PPARα-3＇UTR형광소매활성(P＜0.01).(3)재miR-9혹miR-124과표체적293T세포중,PPARα mRNA화단백표체균강저(P＜0.01).결론 PPARα시miR-9화miR-124공동적파기인,miR-9혹miR-124재전록수평부성조공PPARα적표체.
