军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
12期
907-911
,共5页
刘玉玲%林巍然%郭英飞%杨冬%姜颖
劉玉玲%林巍然%郭英飛%楊鼕%薑穎
류옥령%림외연%곽영비%양동%강영
HBx%肝癌%真核细胞%细胞增殖%细胞凋亡
HBx%肝癌%真覈細胞%細胞增殖%細胞凋亡
HBx%간암%진핵세포%세포증식%세포조망
目的 为了探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系,构建HBV X 基因(hepatitis B virus X gene,HBx)真核表达载体及其肝癌(HCC)细胞系HepG2瞬转模型,并检测HBx对HepG2细胞表型的影响.方法 以 pCMV-HBx为模板,PCR法扩增HBx 基因编码区全长序列,将其克隆至pcDNA3.1-Flag真核表达载体中,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx,转染至HepG2细胞;Western印迹法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;5-溴尿苷(5-溴脱氧尿嘧啶核苷,5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)标记法检测转染HBx后细胞DNA合成变化;细胞周期检测试剂盒( CycleTESTTM PLUS DNA Reagent Kit) 检测转染HBx后细胞周期的变化;Annexin Ⅴ-APC/7-AAD法检测转染HBx后细胞凋亡情况.结果 重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该载体的HepG2细胞可检测到HBx蛋白的表达;与转染空质粒pcDNA3.1-Flag的细胞相比,细胞增殖能力增强,而细胞凋亡比率下降.结论 成功构建了HBx 基因真核表达载体,并研究了HBx 对细胞表型的影响,为进一步探索HBx 参与HBV 引发HCC的分子机制奠定了基础.
目的 為瞭探討乙型肝炎病毒(HBV)X基因與慢性乙型肝炎及肝癌髮生的關繫,構建HBV X 基因(hepatitis B virus X gene,HBx)真覈錶達載體及其肝癌(HCC)細胞繫HepG2瞬轉模型,併檢測HBx對HepG2細胞錶型的影響.方法 以 pCMV-HBx為模闆,PCR法擴增HBx 基因編碼區全長序列,將其剋隆至pcDNA3.1-Flag真覈錶達載體中,構建重組真覈錶達載體pcDNA3.1-Flag-HBx,轉染至HepG2細胞;Western印跡法檢測細胞中HBx蛋白的錶達水平;5-溴尿苷(5-溴脫氧尿嘧啶覈苷,5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)標記法檢測轉染HBx後細胞DNA閤成變化;細胞週期檢測試劑盒( CycleTESTTM PLUS DNA Reagent Kit) 檢測轉染HBx後細胞週期的變化;Annexin Ⅴ-APC/7-AAD法檢測轉染HBx後細胞凋亡情況.結果 重組真覈錶達載體pcDNA3.1-Flag-HBx經雙酶切和測序證明構建正確,轉染該載體的HepG2細胞可檢測到HBx蛋白的錶達;與轉染空質粒pcDNA3.1-Flag的細胞相比,細胞增殖能力增彊,而細胞凋亡比率下降.結論 成功構建瞭HBx 基因真覈錶達載體,併研究瞭HBx 對細胞錶型的影響,為進一步探索HBx 參與HBV 引髮HCC的分子機製奠定瞭基礎.
목적 위료탐토을형간염병독(HBV)X기인여만성을형간염급간암발생적관계,구건HBV X 기인(hepatitis B virus X gene,HBx)진핵표체재체급기간암(HCC)세포계HepG2순전모형,병검측HBx대HepG2세포표형적영향.방법 이 pCMV-HBx위모판,PCR법확증HBx 기인편마구전장서렬,장기극륭지pcDNA3.1-Flag진핵표체재체중,구건중조진핵표체재체pcDNA3.1-Flag-HBx,전염지HepG2세포;Western인적법검측세포중HBx단백적표체수평;5-추뇨감(5-추탈양뇨밀정핵감,5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)표기법검측전염HBx후세포DNA합성변화;세포주기검측시제합( CycleTESTTM PLUS DNA Reagent Kit) 검측전염HBx후세포주기적변화;Annexin Ⅴ-APC/7-AAD법검측전염HBx후세포조망정황.결과 중조진핵표체재체pcDNA3.1-Flag-HBx경쌍매절화측서증명구건정학,전염해재체적HepG2세포가검측도HBx단백적표체;여전염공질립pcDNA3.1-Flag적세포상비,세포증식능력증강,이세포조망비솔하강.결론 성공구건료HBx 기인진핵표체재체,병연구료HBx 대세포표형적영향,위진일보탐색HBx 삼여HBV 인발HCC적분자궤제전정료기출.
