医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2014年
1期
34-37
,共4页
祝强%王婧%董隽%史立新%张旭%洪宝发
祝彊%王婧%董雋%史立新%張旭%洪寶髮
축강%왕청%동준%사립신%장욱%홍보발
雌激素受体α%基因表达%大鼠骨髓基质干细胞%转染%鉴定
雌激素受體α%基因錶達%大鼠骨髓基質榦細胞%轉染%鑒定
자격소수체α%기인표체%대서골수기질간세포%전염%감정
Estrogen receptor α%Gene expression%Rat marrow mesenchymal stem cells%Transfection%Identification
目的 雌激素在很多靶器官中发挥重要生物调节作用,主要通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)来介导.构建ERα真核表达载体并于大鼠骨髓基质干细胞(rat marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)中表达,为后续研究ERα的功能奠定良好的基础. 方法 采用RT-PCR技术从SD大鼠子宫及双侧附件中提取并扩增ERα,酶切后,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+);重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染rBMSCs,采用RT-PCR和Western blotting分析ERα在细胞中的表达,并采用Realtime-PCR和MTT的方法比较ERα高表达后对细胞生长周期的影响. 结果 成功构建了重组质粒pcDNA-ERα,RT-PCR和Westem blotting显示该质粒能在rBMSCs中高效表达,Realtime-PCR和MTT比较分析表明,ERα的高表达对细胞的生长产生一定的抑制作用. 结论 成功构建ERα真核表达载体,该载体在rBMSCs中成功转录与表达,外源性ERα基因转染能使rBMSCs的增殖受抑,可能与ERα的核内高表达相关.
目的 雌激素在很多靶器官中髮揮重要生物調節作用,主要通過雌激素受體(estrogen receptor,ER)來介導.構建ERα真覈錶達載體併于大鼠骨髓基質榦細胞(rat marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)中錶達,為後續研究ERα的功能奠定良好的基礎. 方法 採用RT-PCR技術從SD大鼠子宮及雙側附件中提取併擴增ERα,酶切後,剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+);重組載體經PCR、酶切、測序鑒定正確後瞬時轉染rBMSCs,採用RT-PCR和Western blotting分析ERα在細胞中的錶達,併採用Realtime-PCR和MTT的方法比較ERα高錶達後對細胞生長週期的影響. 結果 成功構建瞭重組質粒pcDNA-ERα,RT-PCR和Westem blotting顯示該質粒能在rBMSCs中高效錶達,Realtime-PCR和MTT比較分析錶明,ERα的高錶達對細胞的生長產生一定的抑製作用. 結論 成功構建ERα真覈錶達載體,該載體在rBMSCs中成功轉錄與錶達,外源性ERα基因轉染能使rBMSCs的增殖受抑,可能與ERα的覈內高錶達相關.
목적 자격소재흔다파기관중발휘중요생물조절작용,주요통과자격소수체(estrogen receptor,ER)래개도.구건ERα진핵표체재체병우대서골수기질간세포(rat marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)중표체,위후속연구ERα적공능전정량호적기출. 방법 채용RT-PCR기술종SD대서자궁급쌍측부건중제취병확증ERα,매절후,극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+);중조재체경PCR、매절、측서감정정학후순시전염rBMSCs,채용RT-PCR화Western blotting분석ERα재세포중적표체,병채용Realtime-PCR화MTT적방법비교ERα고표체후대세포생장주기적영향. 결과 성공구건료중조질립pcDNA-ERα,RT-PCR화Westem blotting현시해질립능재rBMSCs중고효표체,Realtime-PCR화MTT비교분석표명,ERα적고표체대세포적생장산생일정적억제작용. 결론 성공구건ERα진핵표체재체,해재체재rBMSCs중성공전록여표체,외원성ERα기인전염능사rBMSCs적증식수억,가능여ERα적핵내고표체상관.
