国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2012年
23期
2819-2821
,共3页
徐亮%陆奎英%崔素芬%包广宇
徐亮%陸奎英%崔素芬%包廣宇
서량%륙규영%최소분%포엄우
蛋白质类%细胞%培养的%哺乳动物%基因表达
蛋白質類%細胞%培養的%哺乳動物%基因錶達
단백질류%세포%배양적%포유동물%기인표체
目的 构建人DKK1基因的真核表达质粒,表达、纯化、鉴定其表达产物.方法 自宫颈癌组织提取癌细胞,抽提mRNA,RT-PCR获得人DKK1基因片断,构建重组质粒pCMV-HA2/DKK1,EcoRⅠ酶切、测序鉴定重组质粒;借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style 293-F细胞(无血清培养)蛋白印迹法检测DKK1蛋白.结果 RT-PCR获得片断与预期结果相符,酶切鉴定、测序鉴定证实pCMV-HA2/DKK1重组质粒构建成功;DKK1蛋白分泌表达在Free-Style 293-F细胞培养液中,Western Blot鉴定表达产物为DKK1蛋白.结论 成功构建了人DKK1的真核表达质粒,并对该基因的真核表达产物进行鉴定,为下一步的DKK1蛋白对肿瘤发生中的生物学活性研究奠定基础.
目的 構建人DKK1基因的真覈錶達質粒,錶達、純化、鑒定其錶達產物.方法 自宮頸癌組織提取癌細胞,抽提mRNA,RT-PCR穫得人DKK1基因片斷,構建重組質粒pCMV-HA2/DKK1,EcoRⅠ酶切、測序鑒定重組質粒;藉助脂質體將載體瞬時轉染入Free-Style 293-F細胞(無血清培養)蛋白印跡法檢測DKK1蛋白.結果 RT-PCR穫得片斷與預期結果相符,酶切鑒定、測序鑒定證實pCMV-HA2/DKK1重組質粒構建成功;DKK1蛋白分泌錶達在Free-Style 293-F細胞培養液中,Western Blot鑒定錶達產物為DKK1蛋白.結論 成功構建瞭人DKK1的真覈錶達質粒,併對該基因的真覈錶達產物進行鑒定,為下一步的DKK1蛋白對腫瘤髮生中的生物學活性研究奠定基礎.
목적 구건인DKK1기인적진핵표체질립,표체、순화、감정기표체산물.방법 자궁경암조직제취암세포,추제mRNA,RT-PCR획득인DKK1기인편단,구건중조질립pCMV-HA2/DKK1,EcoRⅠ매절、측서감정중조질립;차조지질체장재체순시전염입Free-Style 293-F세포(무혈청배양)단백인적법검측DKK1단백.결과 RT-PCR획득편단여예기결과상부,매절감정、측서감정증실pCMV-HA2/DKK1중조질립구건성공;DKK1단백분비표체재Free-Style 293-F세포배양액중,Western Blot감정표체산물위DKK1단백.결론 성공구건료인DKK1적진핵표체질립,병대해기인적진핵표체산물진행감정,위하일보적DKK1단백대종류발생중적생물학활성연구전정기출.
