山西医药杂志
山西醫藥雜誌
산서의약잡지
SHANXI MEDICAL JOURNAL
2013年
1期
7-9
,共3页
脑炎病毒,日本%病毒蛋白质类%蛋白质C%CHO细胞
腦炎病毒,日本%病毒蛋白質類%蛋白質C%CHO細胞
뇌염병독,일본%병독단백질류%단백질C%CHO세포
目的 构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)C蛋白编码基因重组子并鉴定.方法 以JEV SA14-14-2株总RNA为模板,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增JEV C蛋白编码基因,克隆至pMD19-T Simple载体测序.为便于分析JEV C蛋白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达,在JEV C蛋白编码基因5′端附加FLAG 序列,并亚克隆至pcDNA 3.1(+)载体中,构建重组子pJc并经酶切及DNA测序分析.脂质体法将pJc转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞.免疫荧光检测转染的CHO细胞中JEV C蛋白分布与表达.结果 pJC经BamH I/EcoR I酶切释出的插入子片段(414 bp)分别与预期结果相符合.所编码的融合蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜.结论 pJC成功构建,转染的CHO细胞可表达JEV C蛋白.
目的 構建流行性乙型腦炎病毒(JEV)C蛋白編碼基因重組子併鑒定.方法 以JEV SA14-14-2株總RNA為模闆,應用反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增JEV C蛋白編碼基因,剋隆至pMD19-T Simple載體測序.為便于分析JEV C蛋白編碼基因重組子在哺乳動物細胞中的錶達,在JEV C蛋白編碼基因5′耑附加FLAG 序列,併亞剋隆至pcDNA 3.1(+)載體中,構建重組子pJc併經酶切及DNA測序分析.脂質體法將pJc轉染中華倉鼠卵巢(CHO)細胞.免疫熒光檢測轉染的CHO細胞中JEV C蛋白分佈與錶達.結果 pJC經BamH I/EcoR I酶切釋齣的插入子片段(414 bp)分彆與預期結果相符閤.所編碼的融閤蛋白主要分佈于胞質,少量分佈于胞膜.結論 pJC成功構建,轉染的CHO細胞可錶達JEV C蛋白.
목적 구건류행성을형뇌염병독(JEV)C단백편마기인중조자병감정.방법 이JEV SA14-14-2주총RNA위모판,응용반전록-취합매련반응(RT-PCR)방법확증JEV C단백편마기인,극륭지pMD19-T Simple재체측서.위편우분석JEV C단백편마기인중조자재포유동물세포중적표체,재JEV C단백편마기인5′단부가FLAG 서렬,병아극륭지pcDNA 3.1(+)재체중,구건중조자pJc병경매절급DNA측서분석.지질체법장pJc전염중화창서란소(CHO)세포.면역형광검측전염적CHO세포중JEV C단백분포여표체.결과 pJC경BamH I/EcoR I매절석출적삽입자편단(414 bp)분별여예기결과상부합.소편마적융합단백주요분포우포질,소량분포우포막.결론 pJC성공구건,전염적CHO세포가표체JEV C단백.
