中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
2期
129-132,137
,共5页
余华%熊浚智%何晓梅%盛哈蕾%蔡文强%谢玮%张克斌
餘華%熊浚智%何曉梅%盛哈蕾%蔡文彊%謝瑋%張剋斌
여화%웅준지%하효매%성합뢰%채문강%사위%장극빈
铜绿假单胞菌%弹性蛋白酶%基因敲除%Red重组系统
銅綠假單胞菌%彈性蛋白酶%基因敲除%Red重組繫統
동록가단포균%탄성단백매%기인고제%Red중조계통
目的 敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,获得无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株.方法 采用PCR从pKD46质粒上扩增λ噬菌体的Red重组酶基因,并将其克隆到大肠杆菌和铜绿假单胞菌穿梭质粒pUCP多克隆位点上,电击转化铜绿假单胞菌PAO1感受态细胞,构建PAO1/pUCP-Red基因敲除体系.常规基因操作构建两端与弹性蛋白酶基因上、下游同源,中间为庆大霉素抗性基因的线性打靶片段;并将其电击转化pUCP-Red/PAO1感受态;采用庆大霉素和羧苄青霉素抗性平板初步筛选阳性重组菌;通过PCR、RT-PCR及弹性蛋白酶活性检测方法,鉴定菌株弹性蛋白酶基因的敲除情况.结果 本研究通过构建Red重组系统,获得了无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株.结论 本研究成功敲除了铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,所获无弹性蛋白酶活性的菌株将为系统深入研究弹性蛋白酶在铜绿假单胞菌致病性中的详细作用机理提供材料和基础.
目的 敲除銅綠假單胞菌彈性蛋白酶基因,穫得無彈性蛋白酶活性的銅綠假單胞菌菌株.方法 採用PCR從pKD46質粒上擴增λ噬菌體的Red重組酶基因,併將其剋隆到大腸桿菌和銅綠假單胞菌穿梭質粒pUCP多剋隆位點上,電擊轉化銅綠假單胞菌PAO1感受態細胞,構建PAO1/pUCP-Red基因敲除體繫.常規基因操作構建兩耑與彈性蛋白酶基因上、下遊同源,中間為慶大黴素抗性基因的線性打靶片段;併將其電擊轉化pUCP-Red/PAO1感受態;採用慶大黴素和羧芐青黴素抗性平闆初步篩選暘性重組菌;通過PCR、RT-PCR及彈性蛋白酶活性檢測方法,鑒定菌株彈性蛋白酶基因的敲除情況.結果 本研究通過構建Red重組繫統,穫得瞭無彈性蛋白酶活性的銅綠假單胞菌菌株.結論 本研究成功敲除瞭銅綠假單胞菌彈性蛋白酶基因,所穫無彈性蛋白酶活性的菌株將為繫統深入研究彈性蛋白酶在銅綠假單胞菌緻病性中的詳細作用機理提供材料和基礎.
목적 고제동록가단포균탄성단백매기인,획득무탄성단백매활성적동록가단포균균주.방법 채용PCR종pKD46질립상확증λ서균체적Red중조매기인,병장기극륭도대장간균화동록가단포균천사질립pUCP다극륭위점상,전격전화동록가단포균PAO1감수태세포,구건PAO1/pUCP-Red기인고제체계.상규기인조작구건량단여탄성단백매기인상、하유동원,중간위경대매소항성기인적선성타파편단;병장기전격전화pUCP-Red/PAO1감수태;채용경대매소화최변청매소항성평판초보사선양성중조균;통과PCR、RT-PCR급탄성단백매활성검측방법,감정균주탄성단백매기인적고제정황.결과 본연구통과구건Red중조계통,획득료무탄성단백매활성적동록가단포균균주.결론 본연구성공고제료동록가단포균탄성단백매기인,소획무탄성단백매활성적균주장위계통심입연구탄성단백매재동록가단포균치병성중적상세작용궤리제공재료화기출.
