CAJ | 학술논문

为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1.以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法.结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1:10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1 μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1:10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0.试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应；可以检测出0.2 μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍；批间和批内变异系数均小于10％.本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础.
위료대목전류행적압신성역진행쾌속진단,응용자당밀도제도리심순화후적압신성역병독면역6주령자성Balb/c소서,취면역후소서비세포여골수류세포SP2/0융합.채용ELISA방법사선양성세포극륭,경3차아극륭후획득일주능은정분비압신성역병독특이성단극륭항체적세포주2C1.이PEG순화후적2C1복수위포획항체,신산-류산안순화적토항압신성역병독다극륭항체위제이항체,HRP표기적양항토항체작위매표항체,건립료검측압신성역병독항원적쌍항체협심ELISA방법.결과표명,당2C1포피량위4μg/공,압신성역병독1:10희석,토항압신성역병독다항작용량위0.1 μg/공,HRP표기적양항토이항1:10 000배희석,매차작용시간위1h시,P/N비치최고,차양성OD치최접근1.0.시험표명,해방법특이성호,불여IBV、ARV、GPV、DPV、DHV뇨낭액급H5、H9표준양성항원발생반응；가이검측출0.2 μg순화병독,비전통적HA시험적민감성지소고64배；비간화비내변이계수균소우10％.본연구건립적쌍항체협심ELISA방법위압신성역병독적쾌속진단전정료기출.